| Microscopy-based Methods for Rosetting Assay in Malaria Research
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Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] In malaria, rosetting phenomenon is a condition where a Plasmodium-infected erythrocyte stably adheres to at least an uninfected erythrocyte. This phenomenon that occurs in all species of human malaria parasite is likely to be an immune escape mechanism for the parasite. However, it has been associated with malaria pathogenesis, possibly by facilitating microvasculature occlusion along with direct endothelial cytoadherence by the infected erythrocytes. There are different microscopy-based techniques to visualize rosettes but neither of these techniques has yet to qualify as the official “gold standard” method. We have found that these techniques can be used interchangeably, provided that the conditions of the experiments are properly controlled. Here, we presented three methods ...
[摘要] [摘要 ] 在疟疾中，玫瑰花结现象是疟原虫感染的红血球稳定附着在至少一个未感染的红血球上的情况。在人类疟疾所有种类的寄生虫中发生的这种现象很可能是该寄生虫的免疫逃逸机制。然而，它与疟疾的发病机理有关，可能是由于被感染的红细胞促进了微脉管系统的阻塞以及直接的内源性螺旋细胞粘附。有多种基于显微镜的技术可以可视化花环，但这些技术都尚未成为官方的“金标准” 方法 。我们发现，只要适当控制实验条件，这些技术就可以互换使用。在这里，我们本编三种方法作为选项玫瑰花结测定，即，在未染色的湿涂片技术，吖啶橙基于荧光显微技术和Giemsa染色湿涂片法，条件是使一致的性能的制备步骤在玫瑰花结实验。
[背景 ] 疟疾仍然是热带和亚热带地区许多国家的严重医疗保健问题（世界卫生组织，2019年）。随着宿主体内红细胞中寄生虫的成熟，被感染红细胞的结构发生了重大变化，导致被感染红细胞的细胞粘附性发生了改变，这被认为是严重疟疾发病机理中的重要角色（Craig 等，2012）。）。被感染的红细胞的细胞粘附特征之一是玫瑰花结现象，后期寄生虫感染的红细胞稳定地粘附在至少一个未感染的红细胞上（图1）。自20世纪80年代末发现（大卫等人，1988年），各种方法已经用于可视化花环。这些方法大多数是基于显微镜的，使用用疟疾感染的血液样本制备的湿法固定装置。这些包括未染色的湿装（Udomsangpetch ...
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| Quantifying Podocytes and Parietal Epithelial Cells in Human Urine Using Liquid-based Cytology and WT1 Immunoenzyme Staining
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Date:
2018-05-05
[Abstract] In glomerular disease, podocytes and parietal epithelial cells (PECs) are shed in the urine. Therefore, urinary podocytes and PECs are noninvasive biomarkers of glomerular disease. The purpose of this protocol is to employ immunocytochemistry to detect podocytes and PECs, using the WT1 antibody on liquid-based cytology slides.
[摘要] 在肾小球疾病中，足细胞和顶壁上皮细胞（PEC）在尿中脱落。 因此，尿足细胞和PECs是肾小球疾病的非侵入性生物标志物。 该协议的目的是使用免疫细胞化学来检测足细胞和PEC，在液基细胞学载玻片上使用WT1抗体。
【背景】足细胞排列在肾小球毛细血管的外部，因此面对鲍曼氏囊和初级尿。在肾小球损伤中，足细胞可能从肾小球基底膜脱落。足细胞的脱落及其在尿液中的脱落与肾小球疾病和月牙形成的进展有关。顶壁上皮细胞（PECs）覆盖鲍曼囊的内部。与足细胞类似，已经报道了在活动性肾小球疾病期间PEC对WT1呈阳性，增殖并在尿中脱落（Zhang等人，2012; Fujita等人 >，2017）。
先前的研究已经显示了尿足细胞和PECs的数量与各种类型的肾小球疾病之间的关系（Hara等人，1998; Nakamura等人，2000; Achenbach ，2008）。上述引用的研究使用常规方法（直接涂片和细胞离心涂片）来制备尿样。然而，这些常规方法具有常见问题，包括风干效应和在细胞离心和固定过程期间显着细胞损失的可能性。另外，传统方法的标准化和定量评估是困难的。虽然以前大多数研究使用免疫荧光染色与podocalyxin抗体，但由于特异性抗原和荧光显微镜的要求，这种方法在中小医院很难实现。
有用的尿生物标志物检测应该容易实施，并且对标准化样品制备和免疫细胞化学的要求最低。因此，我们设计了一种通过结合液基细胞学，WT1抗体和免疫酶染色来检测足细胞和PEC的方法。由于其更好的细胞保存和更高的细胞回收率，SurePath ...
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