| α-Synuclein Aggregation Monitored by Thioflavin T Fluorescence Assay
|
|
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Studying the aggregation of amyloid proteins like α-synuclein in vitro is a convenient and popular tool to gain kinetic insights into aggregation as well as to study factors (e.g., aggregation inhibitors) that influence it. These aggregation assays typically make use of the fluorescence dye Thioflavin T as a sensitive fluorescence reporter of amyloid fibril formation and are conducted in a plate-reader-based format, permitting the simultaneous screening of multiple samples and conditions. However, aggregation assays are generally prone to poor reproducibility due to the stochastic nature of fibril nucleation and the multiplicity of modulating factors. Here we present a simple and reproducible protocol to study the aggregation of α-synuclein in a plate-reader based assay.
[摘要] 研究淀粉样蛋白如α-突触核蛋白体外聚集是一种方便和流行的工具，可以获得聚集的动力学见解以及研究因子（例如，聚集抑制剂） 影响它。 这些聚集测定通常利用荧光染料硫磺素T作为淀粉样蛋白原纤维形成的敏感荧光报告物，并且以基于读板器的形式进行，允许同时筛选多个样品和条件。 然而，由于原纤维成核的随机性质和调节因子的多样性，聚集测定通常倾向于较差的再现性。 在这里，我们提出了一个简单和可重复的协议，以研究基于读板器的测定中α-突触核蛋白的聚集。
【背景】内源性蛋白质与淀粉样原纤维的聚集是一种致病过程，与几种疾病相关，例如，神经退行性疾病如阿尔茨海默病（AD）或帕金森病（PD）以及全身性疾病如AL淀粉样变性（ Knowles et al。，2014）。通过基于硫磺素T荧光的聚集测定，可以在基于板读者的装置中在体外中概括该过程，从而允许根据各种影响因素研究淀粉样蛋白的聚集动力学。
硫磺素T（ThT）是一种荧光染料，最初用于组织学样本中的淀粉样蛋白原纤维染色，于1959年由Vassar和Culling（Vassar和Culling，1959），其在体外检测和定量淀粉样纤维的应用
目前，硫代黄素T的聚集测定主要在荧光板读数器中进行，其中例如，96条件可以同时测试。由于原纤维成核的随机性质和影响蛋白质聚集的多种因素，这些测定法具有较差的重现性。因此，已经采用了增加ThT测定的再现性的策略，例如在测量期间使用井板的轨道摇动以及向孔中添加玻璃珠以改善混合（Giehm和Otzen，2010）。 ...
|
|
|
| Evaluation of the Condition of Respiration and Photosynthesis by Measuring Chlorophyll Fluorescence in Cyanobacteria
|
|
Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] Chlorophyll fluorescence measurements have been widely used to monitor the condition of photosynthesis. Furthermore, chlorophyll fluorescence from cyanobacteria reflects the condition of respiration, since cyanobacterial photosynthesis shares several components of electron transport chain with respiration. This protocol presents the method to monitor the condition of both photosynthesis and respiration in cyanobacteria simply by measuring chlorophyll fluorescence in the dark and in the light with pulse amplitude modulation (PAM) chlorophyll fluorometer.
[摘要] 叶绿素荧光测量已被广泛用于监测光合作用的状况。 此外，蓝细菌的叶绿素荧光反映了呼吸的状况，因为蓝藻光合作用与呼吸作用共享电子传递链的几个组成部分。 该协议提供了监测蓝藻光合作用和呼吸作用的方法，只需通过测量黑暗和光照下的叶绿素荧光以及脉冲幅度调制（PAM）叶绿素荧光计。
【背景】叶绿素荧光测量已广泛用于监测许多光合生物体的光合作用条件（Krause和Weis，1991; Govindjee，1995）。在蓝细菌的情况下，光合原核生物，叶绿素荧光不仅受光合作用条件的影响，而且还受其他代谢途径的影响，这是由于细胞内代谢途径之间的可能相互作用。特别是，光合作用和呼吸作用共享电子传递链的几个组成部分，如蓝细菌中的质体醌（PQ）（Aoki and Katoh，1982; Peschek and Schmetterer，1982）。 PQ池的氧化还原状态通过调节状态转变影响叶绿素荧光的产量（Mullineaux和Allen，1986; Mullineaux等人，1997），其是非天然存在的主要组分，蓝藻中的光化学猝灭（Campbell和Öquist，1996）。因此，蓝藻呼吸链直接影响叶绿素荧光，特别是在光合作用不活跃的黑暗中。
由于呼吸的影响，应谨慎测量叶绿素荧光以精确估计蓝藻中的光合作用（Ogawa et ...
|
|
|