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ClaI

Company: New England Biolabs
Catalog#: R0197S
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Method for CRISPR/Cas9 Mutagenesis in Candida albicans
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract]  Candida albicans is the most prevalent and important human fungal pathogen. The advent of CRISPR as a means of gene editing has greatly facilitated genetic analysis in C. albicans. Here, we describe a detailed step-by-step procedure to construct and analyze C. albicans deletion mutants. This protocol uses plasmids that allow simple ligation of synthetic duplex 23mer guide oligodeoxynucleotides for high copy gRNA expression in C. albicans strains that express codon-optimized Cas9. This protocol allows isolation and characterization of deletion strains within nine days. [摘要]  白色念珠菌是最普遍和最重要的人类真菌病原体。 CRISPR作为基因编辑手段的出现极大地促进了 C中的遗传分析。白色假丝酵母。 在这里,我们描述一个详细的分步过程来构建和分析 C。 白色念珠菌缺失突变体。 该协议使用质粒,允许合成的双链体23mer引导寡聚脱氧核苷酸在高拷贝gRNA表达的简单连接。 表达密码子优化的Cas9的白色念珠菌菌株。 该协议允许在9天内分离和鉴定缺失菌株。

【背景】℃。白色念珠菌是一种难以处理遗传的有机体。由于它通常作为不容易进行有性生殖的二倍体存在,所以纯合隐性突变需要对每个基因座进行连续修饰。克隆间规则间隔短回文重复(CRISPR)突变的发展和应用。白色念珠菌促进遗传操作,因为它允许两个等位基因同时突变(Vyas et al。,2015; Min et al。,2016; Ng and Dean,2017 )。 CRISPR基因编辑涉及将RNA引导的核酸酶募集至邻近NGG原型间隔子邻接基序(PAM)的互补靶位点(Jinek等人,2012; Cong等人, 2013年;马里等人,2013年)。 CRISPR相关(Cas)核酸酶通过与结合Cas9的激活CRISPR RNA(tracrRNA)相关的指导RNA之间的互补碱基配对以高特异性进行靶向(Gasiunas等人, ...

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