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Eclipse Ti-E Inverted Microscope System

Company: Nikon Instruments
Catalog#: Eclipse Ti-E
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Ectopic Gene Expression in Macrophages Using in vitro Transcribed mRNA
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  Macrophages are immune cells that contribute to host defense through various mechanisms including phagocytosis and antigen presentation. Their antimicrobial capacity is subverted by clinically important intracellular pathogens such as Mycobacterium tuberculosis. The study of host-pathogen interactions using these cells is therefore of considerable interest. Such studies often seek to express tagged proteins to characterize their activities, localizations, and protein-protein interactions. Here, we describe a robust method for transient protein expression in macrophages using mRNA lipoplex transfections. [摘要]  巨噬细胞是通过包括吞噬作用和抗原呈递在内的多种机制促成宿主防御的免疫细胞。 它们的抗菌能力被临床上重要的细胞内病原体诸如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)所破坏。 因此使用这些细胞进行宿主 - 病原体相互作用的研究具有相当大的意义。 这样的研究通常试图表达标记的蛋白质来表征它们的活性,定位和蛋白质 - 蛋白质相互作用。 在这里,我们描述了使用mRNA脂质复合物转染在巨噬细胞中瞬时蛋白质表达的稳健方法。

【背景】典型的实现蛋白质表达的方法,包括使用阳离子聚合物转染DNA,核转染和病毒转导(Zhang等人,2009)在巨噬细胞中特别困难,因为这些细胞具有对 各种危险信号如胞质DNA。 因此,用于外源基因递送的常规方法导致差的转染效率和细胞死亡。 我们推论,正如最近的报道(Van De Parre等人,2004; McLenachan等人,2004)所述,转染mRNA而不是DNA,将是实现巨噬细胞中蛋白质表达的更好的替代方案 。,2013)。 我们能够实现高转染效率而不损失巨噬细胞活力(Koster等人,2017)。 我们的方法不需要昂贵的设备,可以适应表达外源性和内源性蛋白质。

Quantification of Bacterial Twitching Motility in Dense Colonies Using Transmitted Light Microscopy and Computational Image Analysis
Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract]  A method was developed to allow the quantification and mapping of relative bacterial twitching motility in dense samples, where tracking of individual bacteria was not feasible. In this approach, movies of bacterial films were acquired using differential interference contrast microscopy (DIC), and bacterial motility was then indirectly quantified by the degree to which the bacteria modulated the intensity of light in the field-of-view over time. This allowed the mapping of areas of relatively high and low motility within a single field-of-view, and comparison of the total distribution of motility between samples. [摘要]  开发了一种方法,可以对密集样本中的相对细菌抽动动力进行定量和绘图,在这些样本中追踪单个细菌是不可行的。 在这种方法中,使用微分干涉对比显微镜(DIC)获得细菌膜的电影,然后通过细菌随时间调节视场中的光强度的程度间接量化细菌运动。 这允许在单个视场内绘制相对较高和较低运动性的区域,并比较样本之间运动的总分布。

【背景】Pilus介导的颤动运动表示与鞭毛无关的与表面相关的细菌运动形式。抽动动力被很多细菌病原体利用,包括淋病奈瑟氏球菌和铜绿假单胞菌与潮湿的表面相互作用并移位上皮屏障。在 P。颤动动力受大量基因调控,这些基因允许IV型菌毛的延伸和回缩,以有效地将细菌细胞拖过任何给定的表面以响应环境提示(Mattick,2002; Whitchurch et al。,2004; Burrows,2005)。在我们对 P的研究中。绿脓杆菌发病机制,抽动运动性有助于细菌在内化和多层角膜上皮细菌穿过后从上皮细胞排出(Alarcon等人,2009)。在角膜感染的小鼠模型中,抽动运动对于P是重要的。绿脓杆菌毒力(Zolfaghar et al。,2003)。最近,我们发现在粘膜液体如人眼泪和唾液中发现的糖蛋白DMBT1能够抑制P细胞。绿脓杆菌抽动动力(Li等人,2017)。在那项研究中,我们利用了一种新方法来快速和可靠地量化P.绿脓杆菌抽动动力。该协议在此处介绍。
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