| Expansion of Airway Basal Cells and Generation of Polarized Epithelium
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Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] Airway basal stem cells are the progenitor cells within the airway that exhibit the capacity to self-renew and give rise to multiple types of differentiated airway epithelial cells. This stem cell-derived epithelium displays organized architecture with functional attributes of the airway mucosa. A protocol has been developed to culture and expand human airway basal stem cells while preserving their stem cell properties and capacity for subsequent mucociliary differentiation. This achievement presents a previously unrealized opportunity to maintain a durable supply of progenitor cells derived from healthy donors to differentiate into human primary airway epithelium for cellular and molecular-based studies. Further, basal stem cells can be harvested from patients with a specific airway ...
[摘要] 气道基底干细胞是气道内的祖细胞，表现出自我更新的能力并产生多种类型的分化的气道上皮细胞。这种干细胞来源的上皮细胞显示出具有气道粘膜功能属性的有组织的结构。已经开发了一种方案来培养和扩展人气道基底干细胞，同时保持其干细胞特性和后续粘液分泌的能力。这项成就提供了一个以前未实现的机会，以保持源自健康供体的祖细胞的持久供应，以分化为用于基于细胞和分子的研究的人原发性气道上皮。此外，基底干细胞可以从患有特定气道疾病的患者（例如囊性纤维化）中收集，从而能够在适当的气道粘膜环境下研究疾病特异性细胞的潜在改变的行为。在这里，我们详细描述了一系列气道基底干细胞系列扩增的方案，以实现几乎无限制的气道基底细胞的生成，这些细胞可以储存并随时用于随后的培养和分化。此外，我们描述了气液基底干细胞在空气 - 液体界面处的可渗透Transwell过滤器上的培养和分化，以创建功能性粘膜睫毛伪分层极化气道上皮粘膜。
【背景】气道疾病建模和药物发现已经从在气液界面（ALI）的可渗透Transwell过滤器上生长的原代呼吸道上皮培养物的开发和使用中获益。与永生化细胞系相比，该模型具有几个优点，即原代上皮细胞可以分化成具有多种上皮细胞类型（包括纤毛，浆膜和基底细胞）的气道粘膜，并且它们的排列在体内是相当反映的蜂窝组织。主要的ALI模型表现出功能性微生理过程，包括跳动纤毛和分泌粘液的能力，这些特征在细胞系衍生的上皮单层中显着不存在。此外，原代细胞不依赖于人工永生化或转化，因为细胞系来源的上皮细胞确实存在，因此不受细胞系中可能发生的错误信号传导的阻碍，这可能会错误地表示气道上皮中发生的过程。尽管有这些显着的限制，永生化细胞系被广泛用于模拟和研究气道上皮细胞，因为原发性气道上皮细胞存在自己的一系列挑战。原代上皮细胞在传代数次后无法复制，必须连续收获并分离以完成每组研究。另外，改变或缺失感兴趣基因表达的分子生物学技术难以实现，并且与原代上皮细胞一起维持。这些缺点造成成本和技术障碍，阻碍了原发性ALI培养物的广泛使用，尽管它们在调查气道粘膜方面有明显优势。 ...
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| 3D Co-culture System of Tumor-associated Macrophages and Ovarian Cancer Cells
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Ovarian cancer is fairly unique in that ovarian carcinoma cells can detach and spread directly through peritoneal cavity. It has been unclear, however, how detached cancer cells survive in the peritoneum and form spheroid structure. We have recently reported that there is a strong correlation between Tumor-associated macrophages (TAMs)-associated spheroid and clinical pathology of ovarian cancer, and that TAMs promote spheroid formation and tumor growth at early stages of transcoelomic metastasis in orthotopic mouse models. We have established an in vitro spheroid formation assay using a 3D co-culture system in which mouse GFP+F4/80+CD206+ TAMs isolated from spheroids of ovarian cancer-bearing donor tomatolysM-cre mice were mixed with ...
[摘要] 卵巢癌相当独特，因为卵巢癌细胞可以通过腹膜腔直接分离和扩散。然而，目前还不清楚癌细胞如何在腹膜中存活并形成球状结构。我们最近报道，肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）相关的球状体与卵巢癌的临床病理学之间存在很强的相关性，并且TAMs在原位小鼠模型中促进球体形成和肿瘤生长在转移瘤体转移的早期阶段。我们已经建立了使用3D共培养系统的体外球体形成测定法，其中小鼠GFP + F4 / 80 + CD206 F 从含有卵巢癌的供体番茄lysM-cre小鼠的球状体中分离的TAM与在含有2％基质胶的培养基中的ID8细胞（TAM:ID8比例为1:10）混合并接种到用Matrigel预包被的24孔板上。由于transcoelomic转移也与许多其他癌症，如胰腺癌和结肠癌，TAM介导的球体形成实验将提供一个有用的方法来定义卵巢癌和其他transcoelomic转移癌症的分子机制和治疗目标。
【背景】在美国，卵巢癌（OC）是第二常见的妇科癌症和主要死亡原因（Jemal等人，2009; Siegel等人，2012年） ）。 OC预后不良的主要原因是腹腔内和盆腔广泛植入转移，通常手术无法完全切除。对腹膜转移现象最广泛的解释是肿瘤细胞在延伸到腹膜表面后与原发肿瘤分离，并在腹膜内播种之前通过腹膜液输送到整个腹腔。有人提出，转移瘤的转移过程可分为几个步骤：1）细胞脱落，失巢凋亡的存活和抵抗; ...
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