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Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488

Company: Thermo Fisher Scientific
Catalog#: A-11008
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Other protocol()

Time-of-addition and Temperature-shift Assays to Determine Particular Step(s) in the Viral Life Cycle that is Blocked by Antiviral Substance(s)
Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract]  Viruses infect their host cells to produce progeny virus particles through the sequential steps of the viral life cycle, such as viral attachment, entry, penetration and post-entry events. This protocol describes time-of-addition and temperature-shift assays that are employed to explore which step(s) in the viral life cycle is blocked by an antiviral substance(s). [摘要]  病毒通过病毒生命周期的连续步骤感染它们的宿主细胞以产生子代病毒颗粒,例如病毒附着,进入,穿透和进入后事件。 该协议描述了用于探索病毒生命周期中的哪个或哪些步骤被抗病毒物质阻断的添加时间(time-of-addition)和温度变化分析。

【背景】病毒是专门的细胞内寄生虫,它们劫持宿主细胞机制来复制它们自己的基因组。病毒的生命周期通过感染性病毒颗粒(病毒粒子)附着(结合)到宿主细胞表面并将其穿透(内化,融合)到细胞内区室中进行,其中病毒粒子脱壳(分解)发生,然后是病毒基因组转录/复制,病毒蛋白质合成和病毒体组装,最终导致感染细胞产生和释放子代病毒体(Scheel and Rice,2013)。

为了探索病毒生命周期的哪个或哪些步骤被抗病毒物质阻断,进行药物添加时间实验。简而言之,在病毒接种细胞的不同时间点将病毒和/或宿主细胞添加到病毒和/或宿主细胞中(Chen等人,2017):(1)预处理在病毒接种前带有抗病毒物质的细胞检查该物质是否可以阻断病毒受体以抑制病毒与宿主细胞的附着或者是否可以诱导产生抗病毒宿主因子如干扰素。 (2)对病毒进行预处理,然后将处理过的病毒接种到细胞中,检查抗病毒物质的杀病毒活性或中和活性。 (3)病毒接种期间细胞和病毒的共同处理检查病毒进入步骤的抗病毒效果,包括杀病毒(中和)活性和阻断病毒附着和细胞渗透。 ...

Primary Cultures from Human GH-secreting or Clinically Non-functioning Pituitary Adenomas
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  Pituitary adenomas are among the more frequent intracranial tumors usually treated with both surgical and pharmacological–based on somatostatin and dopamine agonists–approaches. Although mostly benign tumors, the occurrence of invasive behaviors is often detected resulting in poorer prognosis. The use of primary cultures from human pituitary adenomas represented a significant advancement in the knowledge of the mechanisms of their development and in the definition of the determinants of their pharmacological sensitivity. Moreover, recent studies identified also in pituitary adenomas putative tumor stem cells representing, according to the current hypothesis, the real cellular targets to eradicate most malignancies. In this protocol, we describe the procedure to establish primary cultures ... [摘要]  垂体腺瘤是更常见的颅内肿瘤之一,通常用基于生长抑素和多巴胺激动剂手术的手术和药物治疗。 虽然多为良性肿瘤,但侵入性行为的发生常常被检测到,导致预后较差。 来自人类垂体腺瘤的原代培养物的使用代表了对其发育机制的知识以及其药理敏感性决定因素的定义方面的显着进步。 此外,最近的研究也在垂体腺瘤中发现了假定的肿瘤干细胞,根据目前的假设,它代表了根除大多数恶性肿瘤的真实细胞靶标。 在这个协议中,我们描述了从人垂体腺瘤建立原代培养的程序,以及如何选择,体外扩增和表型鉴定推定的垂体腺瘤干细胞。

【背景】垂体腺瘤是最常见的颅内肿瘤之一(高达15%),横断面研究发现每100,000名居民中约有90例发病,其中绝大多数为30岁以上的成年人。大约10%的未经选择的垂体在尸检时进行了检查(即考虑到之前未诊断为垂体疾病的受试者的垂体)( ,Molitch,2017)。尽管通常为良性肿瘤,但垂体腺瘤的处理可因与激素分泌过多相关的临床综合征或发展以治疗抗性,高增殖率,快速复发和绒毛外侵袭为特征的侵袭行为而复杂化(Carreno等人,2017)。成年垂体干细胞的持续存在(Florio,2011)导致垂体腺瘤(以及可能的其他良性瘤形成)的发展可以源自具有干细胞特性(主要是自我更新和分化)的肿瘤细胞的亚群能力),正如已经建立的恶性固体和血液肿瘤一样。

最近的实验证据表明,癌症干细胞(CSC)范例也适用于人和小鼠垂体腺瘤(Donangelo等人,2014; ...

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