| Measurement of ROS in Caenorhabditis elegans Using a Reduced Form of Fluorescein
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Oxidative stress is implicated in the pathogenesis of various neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s disease. Oxidative stress is a result of a disruption of the equilibrium between antioxidants and oxidants, in favor of oxidants. Since mitochondria are major sites of production and reduction of reactive oxygen species (ROS), measurement of ROS levels can help us determine if mitochondrial functional integrity has been compromised. In this protocol, we describe a method to measure the level of ROS in the nematode Caenorhabditis elegans, using chloromethyl-2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate (CM-H2DCFDA).
[摘要] 氧化应激涉及各种神经退行性疾病的发病机制，包括阿尔茨海默病。 氧化应激是抗氧化剂和氧化剂之间平衡中断的结果，有利于氧化剂。 由于线粒体是主要的产生和活性氧（ROS）减少的部位，ROS水平的测量可帮助我们确定线粒体功能完整性是否受到损害。 在该协议中，我们描述了使用氯甲基-2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（CM-H 2），测量线虫秀丽隐杆线虫中ROS的水平的方法，DCFDA）。
【背景】ROS的生命周期与线粒体密切相关。超氧化物是由于线粒体中电子传递链的复合物I和复合物III不可避免地发生电子泄漏而产生的。这种超氧化物然后在线粒体基质和线粒体膜间隙中被过氧化氢歧化。通过这些过程产生的超氧化物和过氧化氢被认为是ROS，其中线粒体负责90％的内源性ROS（Balaban等人，2005）。因此，测量ROS水平将提供对线粒体健康状况的了解。在这里，我们提供了一个协议来确定线虫中的ROS水平。使用CM-H 2 DCFDA（一种还原形式的荧光素的渗透细胞氯甲基衍生物）的线虫。一旦进入细胞内，CM-H 2 DCFDA被细胞内酯酶切割，并且由ROS产生的氧化产生的非荧光H 2 DCF被转化为高度荧光的2 '，7'-二氯荧光素（DCF）。活体C中H 2 DCFDA的荧光强度的成像和测量。 elegans ...
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| Analysis of Mitochondrial Structure in the Body Wall Muscle of Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Mitochondrial function is altered in various pathologies, highlighting the crucial role mitochondria plays in maintaining cellular homeostasis. Mitochondrial structure undergoes constant fission and fusion in response to changing cellular environment. Due to this, analyzing mitochondrial structure could provide insight into the physiological state of the cell. In this protocol, we describe a method to analyze mitochondrial structure in body wall muscles in the nematode Caenorhabditis elegans, using both transgenic and dye-based approaches.
[摘要] 线粒体功能在各种病理学中被改变，突出了线粒体在维持细胞稳态方面发挥的关键作用。 线粒体结构响应不断变化的细胞环境而经历不断的分裂和融合。 因此，分析线粒体结构可以提供对细胞生理状态的了解。 在这个协议中，我们描述了一种使用转基因和基于染料的方法来分析线虫秀丽隐杆线虫体壁细胞线粒体结构的方法。
【背景】线粒体参与ATP产生，细胞呼吸，钙缓冲和反应性氧化物（ROS）代谢（Brookes等人，2004）。线粒体结构和功能是动态和紧密联系的，因此分析线粒体结构可以为线粒体健康状况提供线索（Sarasija and Norman，2015）。我们制定了两套方案来评估秀丽隐杆线虫体壁细胞的线粒体结构。在第一个方案中，我们使用了转基因的ccIs4251株，其中GFP靶向体壁细胞线粒体的基质以显现线粒体（Fire等人，1998） 。在第二种方案中，我们使用线粒体靶向染料，MitoTracker TM Red CMXRos和四甲基罗丹明乙酯（TMRE）来测定体壁肌肉线粒体的结构完整性。通常，用于体内成像的动物是麻醉的，然而麻醉动物可能导致线粒体形态改变（Han等人，2012），使数据分析变得复杂。我们的协议允许活体非麻醉线虫体内线粒体结构的体内成像。
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