| Efficient Transient Gene Knock-down in Tobacco Plants Using Carbon Nanocarriers
|
|
Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Gene knock-down in plants is a useful approach to study genotype-phenotype relationships, render disease resistance to crops, and enable efficient biosynthesis of molecules in plants. Small interfering RNA (siRNA)-mediated gene silencing is one of the most common ways to achieve gene knock-down in plants. Traditionally, siRNA is delivered into intact plant cells by coding the siRNA sequences into DNA vectors, which are then delivered through viral and/or bacterial methods. In this protocol, we provide an alternative direct delivery method of siRNA molecules into intact plant cells for efficient transient gene knock-down in model tobacco plant, Nicotiana benthamiana, leaves. Our approach uses one dimensional carbon-based nanomaterials, single-walled carbon nanotubes (SWNTs), to ...
[摘要] [摘要]植物基因敲低是研究基因型与表型关系，提高作物对病害的抵抗力以及实现植物分子高效生物合成的有用方法。小干扰RNA（siRNA）介导的基因沉默是在植物中实现基因敲低的最常见方法之一。传统上，通过将siRNA序列编码到DNA载体中，将siRNA传递到完整的植物细胞中，然后通过病毒和/或细菌方法传递。在这个协议中，我们提供的siRNA分子的替代直接递送方法为完整的植物细胞的高效瞬时根Ë击倒在模型的烟草植物，烟草本塞姆氏烟草，叶子。我们的方法使用一维碳基纳米材料，单壁碳纳米管（SWNTs）来传递siRNA，而不依赖于病毒/细菌的传递。我们方法的独特优势在于：i ）不需要对siRNA序列进行DNA编码； ii）与非生物方法相比，这种非生物方法可在更广泛的植物物种中起作用，并且iii）使用非生物递送时，调节并发症更少方法，其中基因沉默是瞬时的，而无需对植物基因组进行永久性修饰。
图形摘要：
图形抽象标题
[背景技术[ 0002 ]在1990年代初，植物研究人员研究矮牵牛花的着色发现了通过RNA干扰（RNAi）引起的基因沉默（Van der ...
|
|
|
| Structural Analysis of Bordetella pertussis Biofilms by Confocal Laser Scanning Microscopy
|
|
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract] Biofilms are sessile communities of microbial cells embedded in a self-produced or host-derived exopolymeric matrix. Biofilms can both be beneficial or detrimental depending on the surface. Compared to their planktonic counterparts, biofilm cells display enhanced resistance to killing by environmental threats, chemicals, antimicrobials and host immune defenses. When in biofilms, the microbial cells interact with each other and with the surface to develop architecturally complex multi-dimensional structures. Numerous imaging techniques and tools are currently available for architectural analyses of biofilm communities. This allows examination of biofilm development through acquisition of three-dimensional images that can render structural features of the sessile community. A frequently ...
[摘要] 生物膜是嵌入自生或宿主衍生的外聚合物基质中的微生物细胞的固着群落。根据表面，生物膜可以是有益的或有害的。与浮游生物相比，生物膜细胞表现出更强的抗环境威胁，化学物质，抗菌药物和宿主免疫防御能力。当处于生物膜中时，微生物细胞彼此相互作用并与表面相互作用以形成结构复杂的多维结构。目前，许多成像技术和工具可用于生物膜群落的建筑分析。这允许通过获取可以呈现无柄群落的结构特征的三维图像来检查生物膜的发展。经常使用的工具是共聚焦激光扫描显微镜。我们提出了一个详细的协议，以生长，观察和分析呼吸道人类病原体，百日咳博德特氏菌的生物膜在空间和时间。
【背景】百日咳博德特氏菌（Bordetella pertussis）是上呼吸道的专性人类病原体，引起百日咳或百日咳（Mooi，2010; Dorji et al。，2018）。 B的生物膜。百日咳在各种人造表面上以及静态，摇动和流体流动条件下形成（Mishra et al。，2005; Sloan et al。，2007 ; Serra et al。，2011）。对这些生物膜的显微评估表明，这种细菌产生不规则形状的微集落，由流体通道分隔，嵌入由细胞外DNA（eDNA），蛋白质和多糖组成的外聚合物基质中（Parise et al。，2007; Sloan et al。，2007; Serra et al。，2008; ...
|
|
|
| High Resolution Melting Temperature Analysis to Identify CRISPR/Cas9 Mutants from Arabidopsis
|
|
Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] CRISPR/Cas9 made targeted mutagenesis and genome editing possible for many plant species. One of the ways that the endonuclease is used for plant genetics is the creation of loss-of-function mutants, which typically result from erroneous DNA repair through non-homologous end joining (NHEJ) pathway. The majority of erroneous repair events results in single-bp insertion or deletion. While single-bp insertions or deletions (indels) effectively destroy the function of protein-coding genes through frameshift, detection is difficult due to the small size shift. High-resolution melting temperature analysis allows quick detection, and it does not require any additional pipetting steps after the PCR amplification of the region of interest. In this protocol, we will describe the steps required for ...
[摘要] CRISPR / Cas9可以对许多植物物种进行定向诱变和基因组编辑。 内切核酸酶用于植物遗传学的方法之一是产生功能丧失突变体，其通常由通过非同源末端连接（NHEJ）途径的错误DNA修复引起。 大多数错误的修复事件导致单bp插入或缺失。 虽然单bp插入或缺失（插入缺失）通过移码有效地破坏蛋白质编码基因的功能，但由于小的移位，检测很困难。 高分辨率熔解温度分析允许快速检测，并且在PCR扩增感兴趣区域后不需要任何额外的移液步骤。 在该方案中，我们将描述分析潜在的纯合突变体所需的步骤。
【背景】CRISPR / Cas9核酸酶是一种核糖核蛋白，能够在特定的22个核苷酸序列上切割DNA双链。与其他核酸酶（例如锌指核酸酶和转录激活因子样效应核酸酶（TALEN））相比，CRISPR / Cas9系统的主要优点在于序列特异性由RNA赋予，并且不需要针对每种靶序列的单独蛋白质。这大大降低了成本，单个构造可以定位多达32个目标。由于这种低成本和高效率，CRISPR / Cas9系统现在广泛用于许多植物物种（Baltes和Voytas，2015; Belhaj et al。，2015）。
当CRISPR / Cas9诱导的双链DNA断裂被NHEJ途径错误修复时，修复的序列最常导致小插入缺失，其中一个bp插入缺失是最常见的（Ma et al。，2015; ...
|
|
|