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Date:
2018-03-05
[Abstract] Genetic interaction screens are a powerful methodology to establish novel roles for genes and elucidate functional connections between genes. Such studies have been performed to great effect in single-cell organisms such as yeast and E. coli (Schuldiner et al., 2005; Butland et al., 2008; Costanzo et al., 2010), but similar large-scale interaction studies using targeted reverse-genetic deletions in multi-cellular organisms have not been feasible. We developed a CRISPR/Cas9-based method for deleting genes in C. elegans and replacing them with a heterologous fluorescent reporter (Norris et al., 2015). Recently we took advantage of that system to perform a large-scale, reverse genetic screen using null alleles in animals for the first ...
[摘要] 遗传交互筛选是一种强有力的方法，可为基因建立新的作用并阐明基因之间的功能联系。这样的研究已经在单细胞生物如酵母和E中发挥了极大的作用。 （Schuldiner等人，2005; Butland等人，2008; Costanzo等人，2010），但是，在多细胞生物中使用靶向反向遗传缺失的类似大规模相互作用研究尚不可行。我们开发了一种基于CRISPR / Cas9的方法来删除 C中的基因。 elegans 并用异源荧光报道基因取代它们（Norris等人，2015）。最近，我们利用该系统首次在动物中使用无效等位基因进行大规模的反向遗传筛选，重点关注RNA结合蛋白基因（Norris等人，2017）。这种类型的方法应该类似地适用于 C中的许多其他基因类。线虫。在这里，我们详细介绍了生成双突变体库和执行中等通量竞争性健身测定来测试导致适应性变化的遗传相互作用的方案。
【背景】使用反向遗传无效等位基因的大规模遗传相互作用筛选在动物中以前不可行。 RNAi已被用于研究C中的遗传相互作用。通过在存在单一突变背景下敲除大量不同基因的表达（Baugh等人，2005; Lehner等人）， ，2006）。然而，这种策略受到RNAi敲低效率的限制，从而使结果的解释变得复杂。我们开发了一种用于高效编辑 C的方法。线虫基因组（Norris et ...
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