Immuno-electrophysiology on Neuromuscular Junctions of Drosophila Third Instar Larva
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Author:
Date:
2021-02-05
[Abstract] Alterations in synaptic transmission are critical early events in neuromuscular disorders. However, reliable methodologies to analyze the functional organization of the neuromuscular synapses are still needed. This manuscript provides a detailed protocol to analyze the molecular assembly of the neuromuscular synapses through immune-electrophysiology in Drosophila melanogaster. This technique allows the quantification of the molecular behavior of the neuromuscular synapses by correlating the structural configuration of the synaptic boutons with their electrical activity.
[摘要] [摘要]突触传递的改变是神经肌肉疾病的关键早期事件。但是,仍然需要可靠的方法来分析神经肌肉突触的功能组织。此马努脚本提供了详细的协议,通过在免疫电分析神经肌肉突触的分子组装果蝇黑腹果蝇。该技术通过使突触钮扣的结构构型与其电活动相关联,可以量化神经肌肉突触的分子行为。
[背景]果蝇三龄幼虫的神经肌肉接头(NMJ)的功能组织在研究突触形成和功能的分子机制方面具有突出的优势(Feiguin等,2009 ; Godena等,2011; Romano等。(2014年和2015年;Strah等人,2020年),它在包括人类在内的其他物种中似乎是保守的。在这方面,果蝇NMJs的解剖组织是由多个突触钮扣构成的,这些突触钮扣是在运动轴突的最终乔木形成的。这些结构的分化和维持负责骨骼肌的神经支配,并暗示不同分子的协调作用,专门用于建立细胞接触以及释放,接收和整合神经递质信号传导所需的机制。此外,在果蝇中开发的功能强大的遗传工具以及神经系统对单个神经元的解剖学解析,提供了难得的机会,可以在可区分细胞的组织中进行全基因组范围的分子表型无偏搜索。尽管果蝇已经存在可视化神经肌肉突触建立的单独协议(Sabeva和Bykhovskaia,2017 ; Goel等人,2019 ...
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Quantification of Bacterial Attachment to Tissue Sections
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Here we describe a method to test bacterial adhesion to paraffin embedded tissue sections. This method allows examining binding of different bacterial strains, transfected with a fluorescent protein reporter plasmid to various tissues, to better understand different mechanisms such as colonization. This assay provides a more physiological context to bacterial binding, than would have been achieved using adhesion assays to cell lines. The sections can be imaged using fluorescent microscopy and adhesion of various bacterial strains can be quantified and tested, simultaneously.
[摘要] 在这里我们介绍一种方法来测试石蜡包埋组织切片的细菌粘附。 该方法允许检查用荧光蛋白报道质粒转染的不同细菌菌株与各种组织的结合,以更好地理解不同的机制,例如定殖。 该测定为细菌结合提供了更多的生理学背景,比使用细胞系的粘附测定法已经实现的更多。 可以使用荧光显微镜对切片进行成像,并且可以同时量化和测试各种细菌菌株的粘附。
【背景】许多类型的细菌(共生的和致病的)表达各种粘附分子,允许它们结合到宿主的不同表面(Gur等人,2015; Abed等人 ,2016年;艾萨克森等人,2017年)。这种粘附是至关重要的,因为它是殖民化的第一步,并在不同的环境中在竞争和生存中发挥作用(Schilling et al。,2001)。这些粘附素中的许多是凝集素,在各种细胞上的糖蛋白上的结合糖部分,如上皮细胞和其他细胞(Abed等人,2016; Isaacson等人 ,2016)。多年来,许多研究宿主 - 病原体相互作用的小组使用细胞系和组织培养来试图了解细菌对细胞的粘附。组织切片为定植研究提供了更多的生理学背景,因为它们提供了使用体外组织培养几乎不可能获得的组织和结构。此外,在永生化或癌细胞中,细菌可以结合的表面分子的表达模式可能会改变。为了更好地理解细菌粘附的生理学背景,在正常和病理条件下,我们选择使用细菌附着到组织切片。
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