| Metal-tagging Transmission Electron Microscopy for Localisation of Tombusvirus Replication Compartments in Yeast
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Positive-stranded (+) RNA viruses are intracellular pathogens in humans, animals and plants. To build viral replicase complexes (VRCs) viruses manipulate lipid flows and reorganize subcellular membranes. Redesigned membranes concentrate viral and host factors and create an environment that facilitates the formation of VRCs within replication organelles. Therefore, efficient virus replication depends on the assembly of specialized membranes where viral macromolecular complexes are turned on and hold a variety of functions. Detailed characterization of viral replication platforms in cells requires sophisticated imaging approaches. Here we present a protocol to visualize the three-dimensional organization of the tombusvirus replicase complex in yeast with MEtal-Tagging Transmission Electron ...
[摘要] 正链（+）RNA病毒是人，动物和植物中的细胞内病原体。构建病毒复制酶复合物（VRC）病毒操纵脂质流动和重组亚细胞膜。重新设计的膜集中了病毒和宿主因子，并创造了促进复制细胞器内VRC形成的环境。因此，有效的病毒复制取决于病毒大分子复合物开启并具有各种功能的特殊膜的组装。细胞中病毒复制平台的详细特征需要复杂的成像方法。在这里我们提出一个协议，用肉眼标记透射电子显微镜（METTEM）可视化酵母中的tombusvirus复制酶复合物的三维组织。该协议使我们能够用METTEM和电子断层扫描成像三维病毒复制酶分子的细胞内分布。我们的研究显示病毒复制酶分子如何在特化细胞膜内构建复制复合物。
【背景】正链RNA病毒的复制取决于细胞膜的重塑。细胞内膜作为VRC装配的结构支架，提供调节病毒复制酶活性和保护病毒RNA免受宿主抗病毒防御的必需脂质和辅因子（Miller和Krijnse-Locker，2008; den Boon <等，2010; nagy和pogany，2011;="" nagy，2016）。电子显微镜观察到具有活性vrc的复制细胞器的结构。="" vrc以单个膜囊或'小球'，管状球形立方体膜，双膜囊泡（dmv）或平面寡聚体阵列装配（de="" castro等人，2013）。通常在rna病毒感染的细胞中观察到小球。它们通过在各种细胞器中内陷而形成，并具有对胞质溶胶的狭窄开口（den="" boon="" et=""> ...
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| Quantification of Bacterial Attachment to Tissue Sections
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Here we describe a method to test bacterial adhesion to paraffin embedded tissue sections. This method allows examining binding of different bacterial strains, transfected with a fluorescent protein reporter plasmid to various tissues, to better understand different mechanisms such as colonization. This assay provides a more physiological context to bacterial binding, than would have been achieved using adhesion assays to cell lines. The sections can be imaged using fluorescent microscopy and adhesion of various bacterial strains can be quantified and tested, simultaneously.
[摘要] 在这里我们介绍一种方法来测试石蜡包埋组织切片的细菌粘附。 该方法允许检查用荧光蛋白报道质粒转染的不同细菌菌株与各种组织的结合，以更好地理解不同的机制，例如定殖。 该测定为细菌结合提供了更多的生理学背景，比使用细胞系的粘附测定法已经实现的更多。 可以使用荧光显微镜对切片进行成像，并且可以同时量化和测试各种细菌菌株的粘附。
【背景】许多类型的细菌（共生的和致病的）表达各种粘附分子，允许它们结合到宿主的不同表面（Gur等人，2015; Abed等人 ，2016年;艾萨克森等人，2017年）。这种粘附是至关重要的，因为它是殖民化的第一步，并在不同的环境中在竞争和生存中发挥作用（Schilling et al。，2001）。这些粘附素中的许多是凝集素，在各种细胞上的糖蛋白上的结合糖部分，如上皮细胞和其他细胞（Abed等人，2016; Isaacson等人 ，2016）。多年来，许多研究宿主 - 病原体相互作用的小组使用细胞系和组织培养来试图了解细菌对细胞的粘附。组织切片为定植研究提供了更多的生理学背景，因为它们提供了使用体外组织培养几乎不可能获得的组织和结构。此外，在永生化或癌细胞中，细菌可以结合的表面分子的表达模式可能会改变。为了更好地理解细菌粘附的生理学背景，在正常和病理条件下，我们选择使用细菌附着到组织切片。
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