| Studying the Mechanisms of Developmental Vocal Learning and Adult Vocal Performance in Zebra Finches through Lentiviral Injection
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Here we provide a detailed step-by-step protocol for using lentivirus to manipulate miRNA expression in Area X of juvenile zebra finches and for analyzing the consequences on song learning and song performance. This protocol has four parts: 1) making the lentiviral construct to overexpress miRNA miR-9; 2) packaging the lentiviral vector; 3) stereotaxic injection of the lentivirus into Area X of juvenile zebra finches; 4) analysis of song learning and song performance in juvenile and adult zebra finches. These methods complement the methods employed in recent works that showed changing FoxP2 gene expression in Area X with lentivirus or adeno-associated virus leads to impairments in song behavior.
[摘要] 在这里，我们提供了一个详细的逐步协议，用于使用慢病毒操纵幼年斑胸草雀X区的miRNA表达，并分析对歌曲学习和歌曲表现的影响。 该方案有四个部分：1）使慢病毒构建体过表达miRNA miR-9; 2）包装慢病毒载体; 3）将慢病毒立体定位注入少年斑胸草雀X区; 4）青少年和成年斑马雀的歌曲学习和歌曲表演分析。 这些方法补充了近期工作中使用的方法，这些方法显示，在区域X中用慢病毒或腺相关病毒改变 FoxP2 基因表达导致歌曲行为的损害。
【背景】具有良好特征的歌曲行为和基础神经回路的斑胸草雀提供了独特的动物模型来研究声音通信和相关感觉 - 运动学习的神经机制。近年来，一些实验室开始使用病毒载体来操纵斑胸草雀脑中的基因表达并研究其功能后果。这些努力通过对 FoxP2 基因的研究得到了最好的说明，该基因编码叉头盒p2转录因子。 FoxP2蛋白控制着数百个在神经系统发育中起重要作用的下游基因的表达。人类 FoxP2 基因的突变导致言语和语言障碍（Lai et al。，2001）。在鸣禽中，斑马雀X区域的 FoxP2 基因的敲除或过表达，对于声乐学习至关重要的基底神经节核，严重损害了歌曲的行为（Haesler et al。， 2007; Murugan et al。，2013; Heston and ...
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| Organotypic Explants of the Embryonic Rodent Hippocampus: An Accessible System for Transgenesis
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] This protocol describes the technique of ex-vivo electroporation to target embryonic hippocampal progenitors in an organotypic slice preparation. This technique allows gene perturbation for examining developmental processes in the embryonic hippocampus while retaining the environment and connectivity of the cells. Gene perturbation can include Cre-mediated recombination, RNAi-mediated knockdown, gene overexpression, or a combination of any of these. Ex-vivo electroporation can be performed at a wide range of embryonic stages, giving temporal control to the experimenter. Spatial control can be achieved more easily by preparing the brain in a Petri dish to target particular regions of the hippocampus. The electroporated explant cultures provide a highly tractable system ...
[摘要] 该协议描述了在器官切片制备中靶向胚胎海马祖细胞的体外电穿孔技术。 该技术允许基因摄动检查胚胎海马体的发育过程，同时保持细胞的环境和连接性。 基因扰动可以包括Cre介导的重组，RNAi介导的敲低，基因过表达或这些中任何的组合。 可以在广泛的胚胎阶段进行体外电穿孔，为实验者提供时间控制。 空间控制可以通过在皮氏培养皿中准备大脑来瞄准海马的特定区域来实现。 电穿孔的外植体培养物提供了用于研究包括祖细胞增殖，迁移和细胞命运获取在内的发育过程的高度易处理的系统。
【背景】由于其位于尾端的端脑，海马在可达性方面提出了挑战。胚胎海马甚至更难以接近，需要用子宫外科手术方法进行实验操作。器官切片文化规避了这个问题，同时保留了海马场细胞构筑学的许多方面，包括分子特征和连接性。尽管有描述来自啮齿类动物大脑的海马外植体产后培养的规程（Stoppini等人，1991; ...
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| Boron Uptake Assay in Xenopus laevis Oocytes
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Boron (B) is essential for plant growth and taken up by plant roots as boric acid. Under B limitation, B uptake and translocation in plants are dependent on the boric acid channels located in the plasma membrane. Xenopus leavis oocyte is a reliable heterologous expression system to characterize transport activities of boric acid channels and related major intrinsic proteins (aquaporins). Here, we outline the protocols for expression of boric acid channels and boric acid uptake assay in Xenopus leavis oocytes.
[摘要] 硼（B）对植物生长至关重要，并被植物根部吸收为硼酸。 在B限制下，植物中的B吸收和转运依赖于位于质膜中的硼酸通道。 非洲爪蟾卵母细胞是一种可靠的异源表达系统，用于表征硼酸通道和相关主要内在蛋白（水通道蛋白）的运输活性。 在这里，我们概述了在非洲爪蟾卵母细胞中表达硼酸通道和硼酸摄取测定的方案。
【背景】硼对植物生长是必不可少的，但是它在积累时是有毒的。硼通过鼠李糖聚半乳糖醛酸II区果胶多糖的交联在细胞壁中具有结构功能（Funakawa和Miwa，2015）。在溶液中，B主要以生理pH下的硼酸形式存在[B（OH）3 H 2 O 2 B（OH）4] + - （p k a = 9.24）]。硼酸是一种小的中性分子，因此在生物膜上显示出显着的被动扩散（Dordas等人，2000）。此外，植物利用属于主要内在蛋白质（MIP，水通道蛋白）家族的硼酸通道和硼酸盐出口者（BOR家族）来维持B体内平衡（Takano等人，2008）。
最初，玉米PIP1在非洲爪蟾卵母细胞中表达并且显示出促进硼酸摄入比注水卵母细胞高30％（Dordas et al。 2000>）。然后，显示拟南芥NIP5; 1促进硼酸摄取比注水卵母细胞高5至9倍（Takano等人，2006）。与发现缺乏NIP5; ...
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