| Analysis of the Effect of Sphingomyelinase on Rubella Virus Infectivity in Two Cell Lines
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Rubella is a mildly contagious disease characterized by low-grade fever and a morbilliform rash caused by the rubella virus (RuV). Viruses often use cellular phospholipids for infection. We studied the roles of cellular sphingomyelin in RuV infection. Treatment of cells with sphingomyelinase (SMase) inhibited RuV infection in rabbit kidney-derived RK13 cells and African green monkey (Cercopithecus aethiops) kidney-derived Vero cells. Our data further demonstrated that RuV used cellular sphingomyelin and cholesterol for its binding to cells and membrane fusion at the step of virus entry. Detailed protocols of our assays, which assess the effects of SMase treatment on RuV infectivity in RK13 and Vero cells, are described.
[摘要] 风疹是一种轻度传染性疾病，其特征是低风热和由风疹病毒（RuV）引起的麻疹样皮疹。 病毒通常使用细胞磷脂进行感染。 我们研究了细胞鞘磷脂在RuV感染中的作用。 用鞘磷脂酶（SMase）处理细胞抑制兔肾衍生的RK13细胞和非洲绿猴（ Cercopithecus aethiops ）肾源性Vero细胞中的RuV感染。 我们的数据进一步证明RuV在病毒进入的步骤中使用细胞鞘磷脂和胆固醇来结合细胞和膜融合。 描述了我们的测定的详细方案，其评估了SMase处理对RK13和Vero细胞中RuV感染性的影响。
【背景】风疹病毒（RuV）是一种正链RNA病毒，属于 Togaviridae 家族中的 Rubivirus 属。该家族有两个属， Rubivirus 和 Alphavirus 。风疹病毒是属的鞋底构件的风疹病毒，而许多病毒，例如塞姆利基森林病毒（SFV）和辛德毕斯病毒（SINV），是归类于甲病毒属。 RuV是风疹和先天性风疹综合征（CRS）的致病因子。风疹的特征是低烧，麻疹样皮疹和淋巴结肿大。它通常是一种轻微的疾病。然而，CRS是一种严重的疾病。 CRS导致在怀孕早期患有风疹的母亲所生的新生儿出现多器官缺陷。白内障，感音神经性听力损失和心血管缺陷在CRS中很常见。
以前的研究表明，细胞膜脂质作为RuV感染的结合或进入因子（Mastromarino ...
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| Conditional Knockdown of Proteins Using Auxin-inducible Degron (AID) Fusions in Toxoplasma gondii
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Toxoplasma gondii is a member of the deadly phylum of protozoan parasites called Apicomplexa. As a model apicomplexan, there is a great wealth of information regarding T. gondii’s 8,000+ protein coding genes including sequence variation, expression, and relative contribution to parasite fitness. However, new tools are needed to functionally investigate hundreds of putative essential protein coding genes. Accordingly, we recently implemented the auxin-inducible degron (AID) system for studying essential proteins in T. gondii. Here we provide a step-by-step protocol for examining protein function in T. gondii using the AID system in a tissue culture setting.
[摘要] 弓形虫是原生动物寄生虫称为Apicomplexa致命门的一员。 作为一个复杂的模型，关于T的信息有很多。 gondii的8,000多种蛋白质编码基因，包括序列变异，表达和对寄生虫适应的相对贡献。 然而，需要新的工具来功能性地调查数百个推定的必需蛋白质编码基因。 因此，我们最近实施了生长素诱导降解（AID）系统来研究T中的基本蛋白质。弓形虫。 在这里，我们提供了一个检查蛋白质功能的一步一步的协议。 在组织培养环境中使用AID系统。
【背景】生长素是一类通过靶向某些蛋白质在植物中进行蛋白酶体降解而发出信号的植物激素（Teale等人，2006）。 Kohei Nishimura等人具有将该植物特异性信号传导系统的组分转移到其他真核生物中用于有兴趣的蛋白质（POI）的条件调节，创建生长素诱导降解（AID）系统的聪明想法（Nishimura等人，2009）。这个系统已经被成功地用于几种真核生物，包括疟原虫疟原虫（Kreidenweiss et al。，2013; Philip和Waters，2015）。只需要两个转基因成分来实现这个系统，称为转运抑制剂反应1（TIR1）的植物生长素受体和用AID标记的POI。用生长素（例如，3-吲哚乙酸/ IAA）处理活化SCF ...
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