Buffer, Reference Standard, pH 1.68 0.01 at 25°C, Ricca Chemical

Company: Fisher Scientific

Catalog#: 1492-16

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Published online: 2022-07-20

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Preparation of Amyloid Fibril Networks

Author:

Mirren Charnley, Jay Gilbert, Owen G. Jones and Nicholas P. Reynolds,

Date:

2018-02-20

[Abstract] Networks of amyloid nanofibrils fabricated from common globular proteins such as lysozyme and β-lactoglobulin have material properties that mimic the extracellular microenvironment of many cell types. Cells cultured on such amyloid fibril networks show improved attachment, spreading and in the case of mesenchymal stem cells improved differentiation. Here we describe a detailed protocol for fabricating amyloid fibril networks suitable for eukaryotic cell culture applications. [摘要] 结核分枝杆菌（Mtb）已经发展为从其宿主同化脂肪酸。然而，直到最近，还没有可靠的方法来量化宿主细胞感染期间细菌对脂肪酸的摄取。在这里，我们描述了一种新的方法来量化细胞内的杆菌对脂肪酸的摄取。我们用Mtb组成性表达mCherry感染巨噬细胞，然后用Bodipy-palmitate代谢标记它们。在标记步骤之后，我们在蔗糖垫上分离含有Mtb的吞噬体，并用洗涤剂破坏吞噬体。大量洗涤后，通过流式细胞术分析分离的细菌以确定与细菌相关的Bodipy-棕榈酸酯信号的水平。使用液体培养物中脂肪酸摄取缺陷的Mtb突变体菌株，我们确定该突变体在巨噬细胞感染期间同化比野生型菌株少10倍的Bodipy-棕榈酸酯。这种脂肪酸摄取的定量方法可以用于进一步鉴定参与细胞内Mtb和可能的其他细菌的脂质摄取的途径。

【背景】结核分枝杆菌（Mtb）吸收宿主来源的脂质（脂肪酸和胆固醇）的能力使病原体能够在其宿主内存活（Russell等人，2010; Lovewell 等，2016）。在小鼠感染期间和在人肺组织中，通过巨噬细胞内Mtb上调胆固醇和脂肪酸代谢相关基因来支持这个想法（Schnappinger等人，2003; Rachman等人。2006; Rohde等人，2007;Fontán等人，2008; Tailleux等人，2008; Homolka et al。，2010; Rohde et ...

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