| Analysis of the Effect of Sphingomyelinase on Rubella Virus Infectivity in Two Cell Lines
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Rubella is a mildly contagious disease characterized by low-grade fever and a morbilliform rash caused by the rubella virus (RuV). Viruses often use cellular phospholipids for infection. We studied the roles of cellular sphingomyelin in RuV infection. Treatment of cells with sphingomyelinase (SMase) inhibited RuV infection in rabbit kidney-derived RK13 cells and African green monkey (Cercopithecus aethiops) kidney-derived Vero cells. Our data further demonstrated that RuV used cellular sphingomyelin and cholesterol for its binding to cells and membrane fusion at the step of virus entry. Detailed protocols of our assays, which assess the effects of SMase treatment on RuV infectivity in RK13 and Vero cells, are described.
[摘要] 风疹是一种轻度传染性疾病，其特征是低风热和由风疹病毒（RuV）引起的麻疹样皮疹。 病毒通常使用细胞磷脂进行感染。 我们研究了细胞鞘磷脂在RuV感染中的作用。 用鞘磷脂酶（SMase）处理细胞抑制兔肾衍生的RK13细胞和非洲绿猴（ Cercopithecus aethiops ）肾源性Vero细胞中的RuV感染。 我们的数据进一步证明RuV在病毒进入的步骤中使用细胞鞘磷脂和胆固醇来结合细胞和膜融合。 描述了我们的测定的详细方案，其评估了SMase处理对RK13和Vero细胞中RuV感染性的影响。
【背景】风疹病毒（RuV）是一种正链RNA病毒，属于 Togaviridae 家族中的 Rubivirus 属。该家族有两个属， Rubivirus 和 Alphavirus 。风疹病毒是属的鞋底构件的风疹病毒，而许多病毒，例如塞姆利基森林病毒（SFV）和辛德毕斯病毒（SINV），是归类于甲病毒属。 RuV是风疹和先天性风疹综合征（CRS）的致病因子。风疹的特征是低烧，麻疹样皮疹和淋巴结肿大。它通常是一种轻微的疾病。然而，CRS是一种严重的疾病。 CRS导致在怀孕早期患有风疹的母亲所生的新生儿出现多器官缺陷。白内障，感音神经性听力损失和心血管缺陷在CRS中很常见。
以前的研究表明，细胞膜脂质作为RuV感染的结合或进入因子（Mastromarino ...
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| Flow Cytometric Quantification of Fatty Acid Uptake by Mycobacterium tuberculosis in Macrophages
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Author:
Date:
2018-02-20
[Abstract] Mycobacterium tuberculosis (Mtb) has evolved to assimilate fatty acids from its host. However, until recently, there was no reliable way to quantify fatty acid uptake by the bacteria during host cell infection. Here we describe a new method to quantify fatty acid uptake by intracellular bacilli. We infect macrophages with Mtb constitutively expressing mCherry and then metabolically label them with Bodipy-palmitate. Following the labeling procedure, we isolate Mtb-containing phagosomes on a sucrose cushion and disrupt the phagosomes with detergent. After extensive washes, the isolated bacteria are analyzed by flow cytometry to determine the level of Bodipy-palmitate signal associated with the bacteria. Using a Mtb mutant strain defective in fatty acid uptake in liquid culture we ...
[摘要] 结核分枝杆菌（Mtb）已经发展为从其宿主吸收脂肪酸。然而，直到最近，还没有可靠的方法来量化宿主细胞感染期间细菌对脂肪酸的摄取。在这里，我们描述了一种新的方法来量化细胞内杆菌对脂肪酸的摄取。我们用Mtb组成性表达mCherry感染巨噬细胞，然后用Bodipy-palmitate代谢标记它们。标记程序后，我们在蔗糖垫上分离含有Mtb的吞噬体，并用去污剂破坏吞噬体。大量洗涤后，通过流式细胞术分析分离的细菌以确定与细菌相关的Bodipy-棕榈酸酯信号的水平。使用液体培养物中脂肪酸摄取缺陷的Mtb突变株，我们确定该突变体在巨噬细胞感染期间同化比野生型菌株少10倍的Bodipy-棕榈酸酯。脂肪酸摄取的这种定量方法可用于进一步鉴定参与细胞内Mtb和可能的其他细菌的脂质摄取的途径。
【背景】结核分枝杆菌（Mtb）同化宿主来源的脂质（脂肪酸和胆固醇）的能力使得病原体能够在其宿主内存活（Russell等人，2010; Lovewell 等人，2016）。在小鼠感染期间和在人肺组织中，通过巨噬细胞内的Mtb上调胆固醇和脂肪酸代谢相关基因来支持该想法（Schnappinger等人，2003; Rachman等人，2006; Rohde等人，2007;Fontán等人，2008; Tailleux等人，2008; Homolka et al。，2010; Rohde et ...
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