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Methylene Blue

Company: NACALAI TESQUE
Catalog#: 37125-95
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Other protocol()

Medaka-microinjection with an Upright Microscope
Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract]  We described a simple method for microinjecting DNA/RNA/Protein solutions into medaka eggs under an upright microscope. Medaka is an excellent vertebrate model for reverse genetics, because of its daily spawning, short generation time, and egg transparency. These features enable us to efficiently perform functional genomic analyses of transgenic or genome edited fish. This protocol contains the initial steps necessary to create various types of genetically modified fish. [摘要]  我们已经描述了在直立显微镜下将DNA / RNA /蛋白质溶液显微注射到青eggs蛋中的简单方法。 青aka是一种优秀的反向遗传学脊椎动物模型,因为其每日产卵,短代时间和卵子透明度。 这些特征使我们能够有效地进行转基因或基因组编辑的鱼的功能基因组分析。 该协议包含了创建各种转基因鱼所需的初始步骤。

【背景】青aka是一种小型的淡水硬骨鱼物种,具有脊椎动物模型的特征,包括每日产卵,完整的基因组序列和一些有用菌株的可用性。此外,其蛋的透明度是通过显微注射将DNA / RNA /蛋白质溶液精确地引入蛋的细胞质中。显微注射对于功能基因组分析是重要的;例如,DNA显微注射是产生转基因鱼的不可缺少的技术,并且有助于理解体内基因的功能(Ozato等人,1986)。此外,CRISPR / Cas系统的显微注射能够实现靶向基因组编辑,如敲除和敲入方法(Ansai和Kinoshita,2014,Murakami等人,2017a)。

立体显微镜和直立显微镜均可用于鱼胚胎显微注射。虽然直立显微镜的显微注射正处于不稳定的状态。在本文中,我们描述了一个直立显微镜显微注射法的轮廓。该方法可以与其他方案一起使用,例如用于产生基因敲除或基因敲入系的方案(Ansai和Kinoshita,2014,Murakami等人,2017b)。

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