| Self-organization Assay for Min Proteins of Escherichia coli in Micro-droplets Covered with Lipids
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] The Min system determines the cell division plane of bacteria. As a cue of spatiotemporal regulation, the Min system uses wave propagation of MinD protein (Min wave). Therefore, the reconstitution of the Min wave in cell-sized closed space will lead to the creation of artificial cells capable of cell division. The Min waves emerge via coupling between the reactions among MinD, MinE, and ATP and the differences in diffusion rate on the cell membrane and in the cytoplasm. Because Min waves appear only under the balanced condition of the reaction-diffusion coupling, special attentions are needed towards several technical points for the reconstitution of Min waves in artificial cells. This protocol describes a technical method for stably generating Min waves in artificial cells.
[摘要] [摘要 ] Min系统确定细菌的细胞分裂平面。作为时空调节的提示，Min系统使用MinD 蛋白的波传播（Min wave）。因此，Min波在细胞大小的封闭空间中的重构将导致能够分裂细胞的人造细胞的产生。闵波出现经由耦合之间反应小号中MinD的，的MinE ，和ATP 和所述differenc ES 在细胞膜上的扩散速度和在细胞质中。因为最小波仅在反应扩散耦合的平衡条件下出现， 特别关注，需要对几个技术要点为闽波在人造细胞重建。该协议描述了一种在人造细胞中稳定产生Min波的技术方法。
[背景 ] 敏系统，它决定了细胞分ER 对称细胞分裂，是在细菌细胞内的组织系统的最显着的例子之一（Rothfield 等人，2005;和罗利特马戈林，2013年）。敏系统使用图案形成在细胞内的时间依赖性蛋白梯度的公知的作为敏波（宽松等人，2008; Halatek和Frey，2012;邦尼等人，2013; Zieske 。等人，2016 ; Kohyama 。等人， 2019 ）。Min波是由两种蛋白MinD 和MinE 的反应扩散耦合产生的。通过与ATP结合，MinD 形成二聚体并附着在膜上。的MinE 被招募到的ATP MinD的和诱导ATP酶的活性MinD的。通过MinE ，ATP- MinD 变为ADP- MinD ，并从膜上脱离。ADP- MinD的被转换回ATP- ...
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| Medaka-microinjection with an Upright Microscope
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] We described a simple method for microinjecting DNA/RNA/Protein solutions into medaka eggs under an upright microscope. Medaka is an excellent vertebrate model for reverse genetics, because of its daily spawning, short generation time, and egg transparency. These features enable us to efficiently perform functional genomic analyses of transgenic or genome edited fish. This protocol contains the initial steps necessary to create various types of genetically modified fish.
[摘要] 我们已经描述了在直立显微镜下将DNA / RNA /蛋白质溶液显微注射到青eggs蛋中的简单方法。 青aka是一种优秀的反向遗传学脊椎动物模型，因为其每日产卵，短代时间和卵子透明度。 这些特征使我们能够有效地进行转基因或基因组编辑的鱼的功能基因组分析。 该协议包含了创建各种转基因鱼所需的初始步骤。
【背景】青aka是一种小型的淡水硬骨鱼物种，具有脊椎动物模型的特征，包括每日产卵，完整的基因组序列和一些有用菌株的可用性。此外，其蛋的透明度是通过显微注射将DNA / RNA /蛋白质溶液精确地引入蛋的细胞质中。显微注射对于功能基因组分析是重要的;例如，DNA显微注射是产生转基因鱼的不可缺少的技术，并且有助于理解体内基因的功能（Ozato等人，1986）。此外，CRISPR / Cas系统的显微注射能够实现靶向基因组编辑，如敲除和敲入方法（Ansai和Kinoshita，2014，Murakami等人，2017a）。
立体显微镜和直立显微镜均可用于鱼胚胎显微注射。虽然直立显微镜的显微注射正处于不稳定的状态。在本文中，我们描述了一个直立显微镜显微注射法的轮廓。该方法可以与其他方案一起使用，例如用于产生基因敲除或基因敲入系的方案（Ansai和Kinoshita，2014，Murakami等人，2017b）。
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