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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Live confocal imaging of fluorescent reporters and stains in plant meristems provides valuable measurements of gene expression, protein dynamics, cell polarity, cell division, and growth. The spikelet meristem in the grass Brachypodium distachyon (Brachypodium) is well suited to live imaging because of the ease of dissection, small meristem size, simple arrangement of organs, and because each plant provides abundant spikelet meristems. Brachypodium is also far easier to genetically transform than other grass species. Presented here is a protocol for the growth, staging, dissection, mounting, and imaging of Brachypodium spikelet meristems for live confocal imaging.
[摘要] 荧光报告子和植物分生组织中的染色的活共聚焦成像提供了基因表达，蛋白质动力学，细胞极性，细胞分裂和生长的有价值的测量。 由于易于解剖，小分生组织大小，器官的简单排列，并且因为每种植物提供了丰富的小穗分生组织，因此草 Brachypodium distachyon （Brachypodium）中的小穗分生组织非常适合于活体成像。 短柄草比其他草种更容易进行遗传转化。 这里介绍的是用于活体共聚焦成像的短柄草小穗分生组织的生长，分期，解剖，安装和成像的方案。
植物器官（叶子，树枝，花）起源于分生组织，分生组织是含有干细胞群的植物的生长尖端。转录报告子，荧光融合蛋白和荧光染料的活共聚焦成像提供了关于涉及分生组织维持和器官起始的无数基因产物的重要空间和时间信息。 拟南芥花序分生组织的实时成像是一个持续的探索线（Reddy et al。，2004; Bhatia et al。，2016; Prunet et al。，2016; Willis et al。，2016; Landrein et al。，2018; Shi et al。，2018），而拟南芥之外的植物中分生组织的实时成像受到限制（Deb et al。，2015）。
这里展示的是一种共聚物实时成像方案，用于草 Brachypodium distachyon ...
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] The combination of immunofluorescence and laser scanning confocal microscopy (LSM) is essential to high-resolution detection of molecular distribution in biological specimens. A frequent limitation is the need to image deep inside a tissue or in a specific plane, which may be inaccessible due to tissue size or shape. Recreating high-resolution 3D images is not possible because the point-spread function of light reduces the resolution in the Z-axis about 3-fold, compared to XY, and light scattering obscures signal deep in the tissue. However, the XY plane of interest can be chosen if embedded samples are precisely oriented and sectioned prior to imaging (Figure 1). Here we describe the preparation of frozen tissue sections of the Drosophila wing imaginal disc, which allows us to ...
[摘要] 免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜（LSM）的组合是高分辨率检测生物样品中分子分布的关键。频繁的限制是需要在组织内或在特定的平面深处进行成像，这可能由于组织大小或形状而不可接近。因为与XY相比，光的点扩散函数将Z轴的分辨率降低了约3倍，并且光散射使组织中的深层信号模糊，所以不可能重新创建高分辨率3D图像。然而，如果嵌入的样品在成像之前被精确地定向和切片，则可以选择感兴趣的XY平面（图1）。在这里，我们描述的果蝇翅成像光盘的冰冻组织切片的准备，这使得我们能够获得高分辨率的图像，在整个这个折叠上皮的深度。
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图1.上皮结构和未畸变的折叠模式在发育果蝇翅膀的这个冰冻部分的整个深度中都被揭示出来。通过机翼囊横向背腹节。 A.冷冻切片显示贯穿上皮深度的信号的α-连环蛋白（A'，A“，洋红色）的细胞核（A，绿色）和亚细胞分布。基底表面清晰可辨（箭头）。 A是“A的数字增强图像”。 B.在显示为XZ正交视图的自顶向下视图中收集的图像的Z-堆叠揭示了α-连环蛋白（B'，B“）甚至数字增强图像（B”）的细胞核（B）但很少可辨别的细节。未能揭示基底上皮表面（箭头）。 ...
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