Eppendorf Cell Culture Plates, 24-Well, Non-Treated, Sterile, pyrogen-, DNase-, RNase-, human and bacterial DNA-free. Non-cytotoxic, 1 mL, 60 plates, individually wrapped

Company: Eppendorf

Catalog#: 0030722019

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Published online: 2024-01-20

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Culture and Nucleofection of Postnatal Day 7 Cortical and Cerebellar Mouse Astroglial Cells

Author:

Malek Chouchane and Marcos Romualdo Costa,

Date:

2018-02-05

[Abstract] Lineage reprogramming of astroglial cells isolated from different brain regions leads to the generation of different neuronal subtypes. This protocol describes the isolation and culture of neocortical and cerebellar astrocytes from postnatal mice. We also present a comprehensive description of the main steps towards successful gene delivery in these cells using nucleofection. Neocortex and cerebellum astrocyte cultures obtained with these methods are suitable for the study of molecular and cellular mechanisms involved in direct cell lineage reprogramming into induced neurons (iNs). [摘要] 从不同脑区分离的星形胶质细胞的谱系重编程导致产生不同的神经元亚型。该协议描述了来自出生后小鼠的新皮质和小脑星形胶质细胞的分离和培养。因此，我们全面描述了使用nucleofection在这些细胞中成功进行基因传递的主要步骤。在涉及直接细胞谱系重编程为诱导神经元（iNs）的分子和细胞机制研究中获得的新皮质和小脑星形胶质细胞培养物。

【背景】文献中广泛描述了星形胶质细胞培养（Saura，2007，Schildge等人，2013）。几种方案，主要是细胞分离的步骤数不同，产生足够纯度的星形胶质细胞培养物（高达98％）。然而，大多数方案被描述为“关注从新皮层分离星形胶质细胞并使用化学解离”（Schildge等人，2013）。在这里，我们提供了一种替代方法来产生高浓缩的星形胶质细胞单层，而不需要化学组织解离，这使得方案比以前的方法更快。此外，我们强调新皮层和小脑星形胶质细胞的分离和培养，突出了这两个细胞群体之间的一些重要差异。最后，我们描述了使用核转染在星形胶质细胞中基因递送的替代的，成本有效的方法（Chouchane等人，2017）。该技术由使用特定电压和试剂的细胞电穿孔后直接递送DNA分子组成。与逆转录病毒介导的转染相比（Heines等，2002; Berninger等） / ，2007，Heinrich等人，2012; ...

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