| Immunofluorescence Analysis of Human Endocervical Tissue Explants Infected with Neisseria gonorrhoeae
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Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] Colonization and penetration of the epithelium is the infection-initiating route of mucosal pathogens. The epithelium counteracts infection by eliciting host cell responses while maintaining the mucosal barrier function. The obligate human sexually transmitted bacterium Neisseria gonorrhoeae, or gonococcus (GC) infects the female reproductive tract primarily from the endocervical epithelium. Due to lack of an infection model that mimics all aspects of human infections in the female reproductive tract, GC pathogenesis is poorly understood. This protocol takes advantage of the viability and functional integrity of human cervical tissues propagated in culture to generate an ex vivo infection model. This tissue model maintains the nature of the infection target and ...
[摘要] 上皮的定植和穿透是粘膜病原体的感染启动途径。 上皮细胞通过引发宿主细胞应答来抵抗感染，同时维持粘膜屏障功能。 专性人类性传播细菌淋病奈瑟氏球菌或淋球菌属（GC）主要从宫颈内膜上皮感染女性生殖道。 由于缺乏模仿女性生殖道人类感染的各个方面的感染模型，GC发病机制知之甚少。 该方案利用培养物中繁殖的人宫颈组织的生存力和功能完整性来产生体外感染模型。 这种组织模型保持了感染目标和环境的性质，而没有任何操作，如病毒永生化上皮细胞。 使用免疫荧光显微镜，分析GC与子宫颈上皮细胞的相互作用。
【背景】淋病奈瑟菌（GC）感染人类生殖器上皮，引起淋病，一种常见的性传播感染。女性感染可导致严重的并发症，如盆腔炎，引起输卵管瘢痕和堵塞，易发生异位妊娠或不孕。由于抗生素耐药菌株的流行率增加，淋病又成为重要的公共卫生问题。由于人类是GC的唯一宿主，因此缺乏模仿人类感染各个方面的感染模型是推进我们对GC发病机理的理解的主要障碍。我们建立了人宫颈组织外植体模型和免疫荧光显微镜分析来检测GC感染妇女GC感染的主要部位人间宫颈细胞的机制。这种体外模型保持了宫颈上皮细胞的正常细胞构筑和组织完整性。使用这种模型和免疫荧光分析，我们表明，气相色氨酸定居和渗透到子宫颈组织，在那里他们可能导致症状和播散性淋球菌感染。 ...
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| D-serine Measurements in Brain Slices or Other Tissue Explants
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] D-serine is an atypical amino acid present in the mammalian body (most amino acids in the mammalian body are L-isomers) that is mostly known in neuroscience for its role as a co-agonist controlling the N-methyl D-aspartate receptor (NMDAR). D-serine levels are decreased in patients with schizophrenia and this is thought to mediate, at least in part, the hypofunction of NMDARs that is central to the glutamate hypothesis for the etiology of this neuropsychiatric disorder. D-serine detection was first established using high performance liquid chromatography, a costly and complex technique that requires high levels of expertise. But with the increasing interest in this unconventional amino acid, there is an increasing need for easier, cheaper and more accessible detection methods. Here we ...
[摘要] D-丝氨酸是存在于哺乳动物体内的非典型氨基酸（哺乳动物体内的大部分氨基酸是L-异构体），其在神经科学中主要是作为控制N-甲基D-天冬氨酸受体的共激动剂的作用而已知的NMDA受体）。精神分裂症患者的D-丝氨酸水平降低，这被认为至少部分地介导了NMDARs功能减退，这种谷氨酸假说对于这种神经精神障碍的病因至关重要。 D-丝氨酸检测首先使用高效液相色谱法建立，这是一种昂贵且复杂的技术，需要高水平的专业知识。但随着对这种非常规氨基酸的兴趣日益增加，人们越来越需要更容易，更便宜和更容易获得的检测方法。在这里，我们描述了我们在最近的出版物（Papouin等人，2017b）中采用的安培法，基于生物传感器的方法。它可以对新鲜组织的D-丝氨酸水平进行可靠的测量，如急性脑切片，浓度高于100 nM，技术要求最低。
【背景】N-甲基D-天冬氨酸受体（NMDAR）是脑，脊髓和周围神经系统如肠神经元中神经递质谷氨酸的受体。在肾小管细胞和软骨细胞中也有发现。除谷氨酸外，NMDAR的激活需要在专用结合位点上结合共激动剂（Johnson和Ascher，1987; Kleckner和Dingledine，1988）。非常规氨基酸D-丝氨酸是神经系统众多区域中NMDAR的内源性共激动剂（参见Papouin等人，2017a）。在肝脏和肾脏中也可以发现其丰富的降解和排泄（Montesinos ...
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