Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract] Fast scan cyclic voltammetry (FSCV) is an electrochemical technique that allows sub-second detection of oxidizable chemical species, including monoamine neurotransmitters such as dopamine, norepinephrine, and serotonin. This technique has been used to record the physiological dynamics of these neurotransmitters in brain tissue, including their rates of release and reuptake as well as the activity of neuromodulators that regulate such processes. This protocol will focus on the use of ex vivo FSCV for the detection of dopamine within the nucleus accumbens in slices obtained from rodents. We have included all necessary materials, reagents, recipes, procedures, and analyses in order to successfully perform this technique in the laboratory setting. Additionally, we have also included ...
[摘要] 快速扫描循环伏安法(FSCV)是一种电化学技术,可以亚秒检测可氧化的化学物质,包括单胺类神经递质,如多巴胺,去甲肾上腺素和血清素。 该技术已被用于记录这些神经递质在脑组织中的生理动态,包括它们的释放和再摄取速率以及调节这些过程的神经调节剂的活性。 该方案将集中于使用离体 FSCV检测从啮齿动物获得的切片中的伏隔核内的多巴胺。 我们已经包含了所有必要的材料,试剂,配方,程序和分析,以便在实验室环境中成功地执行该技术。 此外,我们还提供了一些警示点,我们认为这些警告点对于那些在该领域的新手有帮助。
【背景】由于首先将用于检查生理系统的电特性的能力用于临床前科学研究,因此已经开发了许多用于研究突触生理学的技术。从鱿鱼轴突电生理记录的早期到现在的快速扫描循环伏安法(FSCV)在人类帕金森病患者中进行(Kishida et al。,2016; Lohrenz et al。,2016),该领域在相对较短的时间内取得了重大进展。该协议的重点是FSCV,是物理学家,分析化学家和神经科学家之间40多年的创新和合作的技术成果。早在19世纪(Bard和Zoski,2000年),电化学与Michael Faraday和Alessandro Volta一起诞生(Bard and Zoski,2000),直到20世纪20年代,Jaroslav ...
|
Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] This protocol describes a straightforward method to generate specific mutations in the genome of strictly lytic phages. Briefly, a targeting CRISPR-Cas9 system and a repair template suited for homologous recombination are provided inside a bacterial host, here the Gram-positive model Lactococcus lactis MG1363. The CRISPR-Cas9 system is programmed to cleave a specific region present on the genome of the invading phage, but absent from the recombination template. The system either triggers the recombination event or exerts the selective pressure required to isolate recombinant phages. With this methodology, we generated multiple gene knockouts, a point mutation and an insertion in the genome of the virulent lactococcal phage p2. Considering the broad host range of the plasmids used ...
[摘要] 该协议描述了一个直接的方法来产生严格裂解噬菌体的基因组中的特定突变。 简而言之,在细菌宿主(此处为革兰氏阳性模型乳酸乳球菌MG1363)内提供靶向CRISPR-Cas9系统和适合于同源重组的修复模板。 CRISPR-Cas9系统被编程为切割入侵噬菌体的基因组上存在的特定区域,但是缺少重组模板。 该系统触发重组事件或施加分离重组噬菌体所需的选择性压力。 利用这种方法,我们在毒性乳酸球菌噬菌体p2的基因组中产生了多个基因敲除,点突变和插入。 考虑到本协议中使用的质粒的广泛宿主范围,后者可以外推到其他噬菌体 - 宿主对。
【背景】噬菌体是在每个生态系统中发现丰富的细菌病毒(Suttle,2005; Breitbart and Rohwer,2005),毫不奇怪,它们是牛奶的天然居民。噬菌体p2是乳品工业中发现的强毒乳球菌噬菌体的最普遍组( Sk1virus )的模型(Deveau等人,2006; Mahony等人。,2012),它感染革兰氏阳性细菌乳酸乳球菌MG1363,也是基础研究的模式菌株。尽管p2作为参照噬菌体的地位,但几乎一半的基因编码未表征的蛋白质。同样,由宏基因组学确定的绝大多数噬菌体基因在公共数据库中没有功能分配和同系物(Hurwitz等人,2016; Paez-Espino等人, 2016)。
研究基因的方法之一是通过修饰和随后观察所得到的表型。噬菌体基因组只能在宿主内以其生物活性形式进行修饰。强毒噬菌体严格裂解;因此,它们的基因组从未整合到细菌染色体中。这为DNA的体内修饰增加了一个时间限制,只能在短的感染周期内对其进行操作。 ...
|