| Expansion of Airway Basal Cells and Generation of Polarized Epithelium
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Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] Airway basal stem cells are the progenitor cells within the airway that exhibit the capacity to self-renew and give rise to multiple types of differentiated airway epithelial cells. This stem cell-derived epithelium displays organized architecture with functional attributes of the airway mucosa. A protocol has been developed to culture and expand human airway basal stem cells while preserving their stem cell properties and capacity for subsequent mucociliary differentiation. This achievement presents a previously unrealized opportunity to maintain a durable supply of progenitor cells derived from healthy donors to differentiate into human primary airway epithelium for cellular and molecular-based studies. Further, basal stem cells can be harvested from patients with a specific airway ...
[摘要] 气道基底干细胞是气道内的祖细胞，表现出自我更新的能力并产生多种类型的分化的气道上皮细胞。这种干细胞来源的上皮细胞显示出具有气道粘膜功能属性的有组织的结构。已经开发了一种方案来培养和扩展人气道基底干细胞，同时保持其干细胞特性和后续粘液分泌的能力。这项成就提供了一个以前未实现的机会，以保持源自健康供体的祖细胞的持久供应，以分化为用于基于细胞和分子的研究的人原发性气道上皮。此外，基底干细胞可以从患有特定气道疾病的患者（例如囊性纤维化）中收集，从而能够在适当的气道粘膜环境下研究疾病特异性细胞的潜在改变的行为。在这里，我们详细描述了一系列气道基底干细胞系列扩增的方案，以实现几乎无限制的气道基底细胞的生成，这些细胞可以储存并随时用于随后的培养和分化。此外，我们描述了气液基底干细胞在空气 - 液体界面处的可渗透Transwell过滤器上的培养和分化，以创建功能性粘膜睫毛伪分层极化气道上皮粘膜。
【背景】气道疾病建模和药物发现已经从在气液界面（ALI）的可渗透Transwell过滤器上生长的原代呼吸道上皮培养物的开发和使用中获益。与永生化细胞系相比，该模型具有几个优点，即原代上皮细胞可以分化成具有多种上皮细胞类型（包括纤毛，浆膜和基底细胞）的气道粘膜，并且它们的排列在体内是相当反映的蜂窝组织。主要的ALI模型表现出功能性微生理过程，包括跳动纤毛和分泌粘液的能力，这些特征在细胞系衍生的上皮单层中显着不存在。此外，原代细胞不依赖于人工永生化或转化，因为细胞系来源的上皮细胞确实存在，因此不受细胞系中可能发生的错误信号传导的阻碍，这可能会错误地表示气道上皮中发生的过程。尽管有这些显着的限制，永生化细胞系被广泛用于模拟和研究气道上皮细胞，因为原发性气道上皮细胞存在自己的一系列挑战。原代上皮细胞在传代数次后无法复制，必须连续收获并分离以完成每组研究。另外，改变或缺失感兴趣基因表达的分子生物学技术难以实现，并且与原代上皮细胞一起维持。这些缺点造成成本和技术障碍，阻碍了原发性ALI培养物的广泛使用，尽管它们在调查气道粘膜方面有明显优势。 ...
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| Mouse Satellite Cell Isolation and Transplantation
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] Satellite cell (SC) transplantation represents a powerful strategy to investigate SC biology during muscle regeneration. We described here a protocol for SC isolation from green fluorescent protein (GFP)-expressing mice and their transplantation into murine muscles. This procedure was originally used to assess the effects of the hormone unacylated ghrelin on muscle regeneration, in particular evaluating how the increase of unacylated ghrelin in the recipient muscle affected the engraftment of donor SCs (Reano et al., 2017).
[摘要] 卫星细胞（SC）移植代表了肌肉再生期间SC生物学研究的强大策略。 我们在这里描述了从绿色荧光蛋白（GFP）表达的小鼠和他们的小鼠肌肉移植SC分离的协议。 该程序最初用于评估激素非酰化生长素释放肽对肌肉再生的影响，特别是评估受体肌肉中未酰化的生长素释放肽的增加如何影响供体SC的植入（Reano等人，2017年）。
【背景】由分化的肌纤维组成的骨骼肌可以在受伤时再生。肌肉再生依赖于居住在肌肉纤维基底层之下的称为卫星细胞（SC）的静止驻留干细胞群（Mauro，1961）。受伤后，SC经历激活，广泛的增殖，分化和融合，最终修复或替换受损的肌纤维（Collins等人，2005）。
由于移植的成肌细胞可以与宿主成肌细胞融合，因此SC的移植被认为是杜氏肌营养不良症（DMD）的潜在疗法多年的时间，这提示了在缺陷纤维中功能性修复的可能性（Partridge ...
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| Mouse Model of Immune Complex-mediated Vasculitis in Dorsal Skin and Assessment of the Neutrophil-mediated Tissue Damage
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] Neutrophils are the most abundant leukocytes in the blood. In the recent decades, their crucial roles in host defense, immune regulation and tissue damage have been studied in a deeper dimension. In this protocol, we described a mouse model of immune complex-mediated vasculitis in the dorsal skin induced by Arthus reaction, and the subsequent analysis of edema, hemorrhage and tissue damage due to neutrophil activation by means of Evans blue area analysis, histology, and immunofluorescence. This protocol could facilitate the investigation of cellular therapy strategy against over-activated neutrophil-mediated tissue damage.
[摘要] 嗜中性粒细胞是血液中最丰富的白细胞。 近几十年来，它们在宿主防御，免疫调节和组织损伤方面的关键作用已经得到了更深入的研究。 在这个协议中，我们描述了Arthus反应诱导的背部皮肤中的免疫复合物介导的血管炎的小鼠模型，以及随后通过伊文思蓝区域分析，组织学和分析由于嗜中性粒细胞活化引起的水肿，出血和组织损伤免疫荧光。 该协议可以促进细胞治疗策略对过度活化的嗜中性粒细胞介导的组织损伤的调查。
【背景】嗜中性粒细胞构成循环白细胞的最大的进化保守部分。他们引导第一波主机防御感染或组织损伤。嗜中性粒细胞介导的细胞毒性的体外模型已被充分证实（Incani等人，1981; Dallegri等人，1984; Saffarzadeh等人，等人，2012年）。但是，为了剖析中性粒细胞介导的无菌组织损伤的复杂性，“体内”模型是必不可少的。
免疫复合物（IC）介导的血管炎是由抗原 - 抗体复合物在血管中沉积引发的疾病，其随后导致补体激活，嗜中性粒细胞募集和活化。活化的嗜中性粒细胞释放的大量活性氧和蛋白酶损害血管壁的内皮衬里并导致水肿和出血（Sindrilaru等人，2007; Goerge等人， ，2008; ...
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