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0.5 mol/L EDTA solution (pH 8.0)

Company: NACALAI TESQUE
Catalog#: 14347-21
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Self-organization Assay for Min Proteins of Escherichia coli in Micro-droplets Covered with Lipids
Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract]  The Min system determines the cell division plane of bacteria. As a cue of spatiotemporal regulation, the Min system uses wave propagation of MinD protein (Min wave). Therefore, the reconstitution of the Min wave in cell-sized closed space will lead to the creation of artificial cells capable of cell division. The Min waves emerge via coupling between the reactions among MinD, MinE, and ATP and the differences in diffusion rate on the cell membrane and in the cytoplasm. Because Min waves appear only under the balanced condition of the reaction-diffusion coupling, special attentions are needed towards several technical points for the reconstitution of Min waves in artificial cells. This protocol describes a technical method for stably generating Min waves in artificial cells. [摘要]  [摘要 ] Min系统确定细菌的细胞分裂平面。作为时空调节的提示,Min系统使用MinD 蛋白的波传播(Min wave)。因此,Min波在细胞大小的封闭空间中的重构将导致能够分裂细胞的人造细胞的产生。闵波出现经由耦合之间反应小号中MinD的,的MinE ,和ATP 和所述differenc ES 在细胞膜上的扩散速度和在细胞质中。因为最小波仅在反应扩散耦合的平衡条件下出现, 特别关注,需要对几个技术要点为闽波在人造细胞重建。该协议描述了一种在人造细胞中稳定产生Min波的技术方法。

[背景 ] 敏系统,它决定了细胞分ER 对称细胞分裂,是在细菌细胞内的组织系统的最显着的例子之一(Rothfield 等人,2005;和罗利特马戈林,2013年)。敏系统使用图案形成在细胞内的时间依赖性蛋白梯度的公知的作为敏波(宽松等人,2008; Halatek和Frey,2012;邦尼等人,2013; Zieske 。等人,2016 ; Kohyama 。等人, 2019 )。Min波是由两种蛋白MinD 和MinE 的反应扩散耦合产生的。通过与ATP结合,MinD 形成二聚体并附着在膜上。的MinE 被招募到的ATP MinD的和诱导ATP酶的活性MinD的。通过MinE ,ATP- MinD 变为ADP- MinD ,并从膜上脱离。ADP- MinD的被转换回ATP- ...

Genotyping-free Selection of Double Allelic Gene Edited Medaka Using Two Different Fluorescent Proteins
Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract]  This protocol describes a simple genotyping using two different colors of fluorescent protein genes inserted at the target locus. This method makes it possible to determine the genotype of each individual simply by observing the fluorescence later than F1 generation. [摘要]  该协议描述了使用两种不同颜色的荧光蛋白基因插入目标基因座的简单基因分型。这种方法可以简单地通过观察比F1代更晚的荧光来确定每个个体的基因型。

【背景】由于基因组编辑动物的常规基因分型在很大程度上取决于基于PCR的基因分型,所以有必要提取基因组DNA。在青aka中,尾鳍是一种易于再生的组织,因此经常用于基因分型以保持鱼的活力。要切断尾鳍,必须喂鱼几周,使其长得足够大(体长约1厘米)。喂养和照顾许多鱼费时费力。因此,希望减少繁殖早期如胚和早期幼虫的鱼的数量,以减少任务。然而,由于胚胎和幼虫的尾鳍太小而脆弱,因此很难将它们活下来。为了克服这个问题,基因分型的一个简单和非侵入性的方法是必不可少的。因此,我们开发了一种新的方法,只需通过观察荧光就可以无创地确定每个胚胎期的基因型。我们在基因敲入实验中证实了该方法的益处,该实验针对在受精后4天(dpf)(Murakami)在中枢神经系统(CNS)中表达的生长相关蛋白43( gap43 et al 。,2017)。这个基因适用于基因敲入实验,因为在先前的研究中,已经通过RT-PCR和原位杂交揭示了其时空表达模式(Fujimori等, 。,2008)。如果野生型靶基因的表达模式是未知的,则需要通过RT-PCR或任何其他技术来分析,以证实其与基因敲入菌株中报道基因的对应性。

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