| Self-organization Assay for Min Proteins of Escherichia coli in Micro-droplets Covered with Lipids
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] The Min system determines the cell division plane of bacteria. As a cue of spatiotemporal regulation, the Min system uses wave propagation of MinD protein (Min wave). Therefore, the reconstitution of the Min wave in cell-sized closed space will lead to the creation of artificial cells capable of cell division. The Min waves emerge via coupling between the reactions among MinD, MinE, and ATP and the differences in diffusion rate on the cell membrane and in the cytoplasm. Because Min waves appear only under the balanced condition of the reaction-diffusion coupling, special attentions are needed towards several technical points for the reconstitution of Min waves in artificial cells. This protocol describes a technical method for stably generating Min waves in artificial cells.
[摘要] [摘要 ] Min系统确定细菌的细胞分裂平面。作为时空调节的提示，Min系统使用MinD 蛋白的波传播（Min wave）。因此，Min波在细胞大小的封闭空间中的重构将导致能够分裂细胞的人造细胞的产生。闵波出现经由耦合之间反应小号中MinD的，的MinE ，和ATP 和所述differenc ES 在细胞膜上的扩散速度和在细胞质中。因为最小波仅在反应扩散耦合的平衡条件下出现， 特别关注，需要对几个技术要点为闽波在人造细胞重建。该协议描述了一种在人造细胞中稳定产生Min波的技术方法。
[背景 ] 敏系统，它决定了细胞分ER 对称细胞分裂，是在细菌细胞内的组织系统的最显着的例子之一（Rothfield 等人，2005;和罗利特马戈林，2013年）。敏系统使用图案形成在细胞内的时间依赖性蛋白梯度的公知的作为敏波（宽松等人，2008; Halatek和Frey，2012;邦尼等人，2013; Zieske 。等人，2016 ; Kohyama 。等人， 2019 ）。Min波是由两种蛋白MinD 和MinE 的反应扩散耦合产生的。通过与ATP结合，MinD 形成二聚体并附着在膜上。的MinE 被招募到的ATP MinD的和诱导ATP酶的活性MinD的。通过MinE ，ATP- MinD 变为ADP- MinD ，并从膜上脱离。ADP- MinD的被转换回ATP- ...
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| Determination of H+-ATPase Activity in Arabidopsis Guard Cell Protoplasts through H+-pumping Measurement and H+-ATPase Quantification
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] The opening of stomata in plants in response to blue light is driven by the plasma membrane H+-ATPase in guard cells. To evaluate the activation of the H+-ATPase in vivo, we can use H+-pumping by guard cells in response to blue light and fusicoccin. To do this, it is required to prepare a large amount of guard cell protoplasts and measure H+-pumping in the protoplasts. It is also necessary to determine the protein amount of H+-ATPase. In this protocol, we describe the procedures required for these preparations and measurements.
[摘要] 响应蓝光的植物气孔的开放是由保卫细胞中的质膜H + -ATPase驱动的。 为了评价体内H + -ATP酶的激活，我们可以使用H + +保卫细胞对蓝光的响应，fusicoccin。 为此，需要制备大量的保卫细胞原生质体，并测量原生质体中的H + - 抽吸。 还需要确定H + -ATP酶的蛋白质量。 在这个协议中，我们描述了这些准备和测量所需的程序。
【背景】响应于蓝光的气孔的开放是由穿过保卫细胞质膜上的H +介导的膜超极化驱动的（Assmann等，1985; Shimazaki等人，1986），并且是由质膜H + -ATP酶引起的（Kinoshita和Shimazaki，1999）。 H + -ATP酶在膜上产生电化学梯度，并提供植物细胞中许多次级运输所需的能量。然而，测量体内H + -ATP酶活性并不容易。利用保卫细胞的蓝光敏感特性，我们的方法可以将体内H +泵送作为体内测量H + + 使用拟南芥保卫细胞原生质体的ATP酶活性（Ueno等人，2005）。与通过蛋白质印迹（Yamauchi等人，2016）的Hβ+ -ATPase定量一起，该方法允许比较Hβ+ -ATPase活性不同的条件或突变背景。
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