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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] This protocol was developed to increase the richness of information available from in vivo T cell proliferation studies. DNA labelling techniques such as BrdU incorporation allow precise control of label administration and withdrawal, so that the division history of a population can be tracked in detail over long timeframes (days-weeks). Ki67 is expressed in the nucleus of dividing cells, and is retained for a short time (3-4 days) after division (Gossel et al., 2017); therefore acting as a molecular clock to identify cells that have recently divided. Combining these two techniques allows the integration of current and historical proliferation information from individual cells within a population. This data can subsequently be used to probe population dynamics by fitting ...
[摘要] 该协议的开发是为了增加从体内T细胞增殖研究中获得的信息的丰富性。 诸如BrdU掺入的DNA标记技术允许精确控制标记施用和撤回，从而可以在很长时间段（日 - 周）内详细地追踪群体的分裂历史。 Ki67在分裂细胞的细胞核中表达，并在分裂后短时间（3-4天）保留（Gossel等人，2017）。 因此充当分子时钟来识别最近分裂的细胞。 将这两种技术结合起来就可以整合来自个体细胞的当前和历史扩散信息。 这个数据随后可以用来通过拟合增殖的数学模型来探测种群动态（Gossel et al。，2017）。
【背景】量化T细胞死亡和分裂的动力学是一个重大的实验和计算挑战，但是这个信息对于我们理解一个健康的免疫系统如何发展和维持至关重要。 T细胞群体动态的体内分析有多种技术，但数据的解释是复杂的，结果可能是模型依赖的（Asquith et al。2002 ; De Boer和Perelson，2013）。许多这些分析基于流式细胞仪读数，通过利用多参数分析的潜力提供获得新颖见解的机会。 BrdU吸收与Ki67表达一起的分析结合是特别有用的，因为每个代表细胞分裂的独特参数。 BrdU是掺入分裂细胞DNA中的胸苷类似物，因此永久标记在标记期间已分裂的细胞（Tough和Sprent，1994; ...
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