Embryonic Intravitreous Injection in Mouse
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Axons of retinal ganglion cells (RGCs) relay visual information from the retina to lateral geniculate nucleus (LGN) and superior colliculus (SC), which are two major image-forming visual nuclei. Wiring of these retinal projections completes before vision begins. However, there are few studies on retinal axons at embryonic stage due to technical difficulty. We developed a method of embryonic intravitreous injection of dyes in mice to visualize retinal projections to LGN and SC. This study opens up the possibility of understanding early visual circuit wiring in mice embryos.
[摘要] 视网膜神经节细胞(RGC)的轴突将视觉信息从视网膜传递到外侧膝状核(LGN)和上丘(SC),这是两个主要的成像视觉核。 在视力开始之前完成这些视网膜投射的布线。 然而,由于技术困难,很少有关于胚胎期视网膜轴突的研究。 我们开发了一种胚胎玻璃体内注射染料的方法,用于观察LGN和SC的视网膜投射。 这项研究开辟了理解小鼠胚胎早期视觉电路布线的可能性。
【背景】早在胚胎第14.5天(E14.5)小鼠中,视网膜轴突开始向LGN和SC投射。 为了研究胚胎中的轴突投射,需要在注射手术前保持胚胎存活至少10小时,玻璃内注射染料。 以前的研究表明,胚胎可以使用含氧小鼠血清进行体外培养。 然而,营养多样性,氧饱和度和温度调节等问题会影响胚胎的生理状况。 在我们的研究中,我们通过胚胎中的子宫壁和眼睑进行玻璃体内注射,并在注射后将它们保存在子宫中。 从E15.5到E18.5很好地标记了对LGN和SC的视网膜轴突投射。
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Boron Uptake Assay in Xenopus laevis Oocytes
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Boron (B) is essential for plant growth and taken up by plant roots as boric acid. Under B limitation, B uptake and translocation in plants are dependent on the boric acid channels located in the plasma membrane. Xenopus leavis oocyte is a reliable heterologous expression system to characterize transport activities of boric acid channels and related major intrinsic proteins (aquaporins). Here, we outline the protocols for expression of boric acid channels and boric acid uptake assay in Xenopus leavis oocytes.
[摘要] 硼(B)对植物生长至关重要,并被植物根部吸收为硼酸。 在B限制下,植物中的B吸收和转运依赖于位于质膜中的硼酸通道。 非洲爪蟾卵母细胞是一种可靠的异源表达系统,用于表征硼酸通道和相关主要内在蛋白(水通道蛋白)的运输活性。 在这里,我们概述了在非洲爪蟾卵母细胞中表达硼酸通道和硼酸摄取测定的方案。
【背景】硼对植物生长是必不可少的,但是它在积累时是有毒的。硼通过鼠李糖聚半乳糖醛酸II区果胶多糖的交联在细胞壁中具有结构功能(Funakawa和Miwa,2015)。在溶液中,B主要以生理pH下的硼酸形式存在[B(OH)3 H 2 O 2 B(OH)4] + - (p k a = 9.24)]。硼酸是一种小的中性分子,因此在生物膜上显示出显着的被动扩散(Dordas等人,2000)。此外,植物利用属于主要内在蛋白质(MIP,水通道蛋白)家族的硼酸通道和硼酸盐出口者(BOR家族)来维持B体内平衡(Takano等人,2008)。
最初,玉米PIP1在非洲爪蟾卵母细胞中表达并且显示出促进硼酸摄入比注水卵母细胞高30%(Dordas et al。 2000>)。然后,显示拟南芥NIP5; 1促进硼酸摄取比注水卵母细胞高5至9倍(Takano等人,2006)。与发现缺乏NIP5; ...
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Drosophila Model of Leishmania amazonensis Infection
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Date:
2017-12-05
[Abstract] This protocol describes how to generate and harvest antibody-free L. amazonensis amastigotes, and how to infect adult Drosophila melanogaster with these parasites. This model recapitulates key aspects of the interactions between Leishmania amastigotes and animal phagocytes.
[摘要] 该协议描述了如何产生和收获无抗体的L型。 amazonensis amastigotes,以及如何用这些寄生虫感染成年果蝇(Drosophila melanogaster)。 这个模型概括了利什曼原虫和动物吞噬细胞之间相互作用的关键方面。
【背景】由利什曼原虫引起的利什曼病,根据宿主的寄生虫种类和免疫状态,影响皮肤,粘膜或内脏器官。 尽管小鼠感染模型已经提供了我们对这种寄生虫感染的大部分了解,但它并不适合于大规模的探索性方法。 在我们的实验室,我们利用果蝇黑腹果蝇的易处理和强大的遗传学来建立利什曼原虫感染的模型并进行小规模的筛选来鉴定涉及的宿主基因 在这些寄生虫的吞噬中(Okuda等人,2016)。 具体而言,使用UAS-GAL4表达系统(Brand和Perrimon,1993),可能与吞噬作用相关的一组基因被特异性敲低,监测突变体感染的苍蝇的存活和寄生物负荷以鉴定 调节感染的因素。
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