| In vitro Explant Cultures to Interrogate Signaling Pathways that Regulate Mouse Lung Development
|
|
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Early mouse lung development, including specification of primordia, patterning of early endoderm and determination of regional progenitor cell fates, is tightly regulated. The ability to culture explanted embryonic lung tissue provides a tractable model to study cellular interactions and paracrine factors that regulate these processes. We provide up-to-date protocols for the establishment of this culture model and its application to investigate hedgehog signaling in the developing lung.
[摘要] 早期鼠肺发育，包括原基的规范，早期内胚层的构图和区域祖细胞命运的确定，受到严格的调控。 培养移植胚胎肺组织的能力提供了一种易处理的模型来研究调节这些过程的细胞相互作用和旁分泌因子。 我们提供最新的协议，以建立这种文化模式及其应用来研究肺部发育中的刺猬信号。
【背景】小鼠肺发育起始于前肠前内胚层的内胚层憩室（E9.5），随后关闭近端气管食管中隔以形成不同的气管和食道管（Minoo和King，1994）。原始内胚层管的随后分支通过E12.5产生平面肺结构，随后正交分支产生成熟肺的三维结构特征（Metzger等人，2008）。在E12.5之前分离的肺遗传的平面结构适合于在空气液体界面进行体外培养（Carraro等人，2010; Del Moral和Warburton， 2010）。胚胎肺通过解剖使用立体显微镜在亮场照明下或通过与谱系追踪和荧光报道分子偶联时的荧光照明进行分离。在这里，我们描述了使用Shh Cre / Rosa mTmG报告小鼠，其允许Cre介导的从约E8.75起在前部前肠内胚层内的膜定位的GFP的激活（Montgomery <等人，2007;高斯等人，2009; Yao等人，2017）。因此，肺内胚层通过红色荧光由绿色荧光和周围组织显现，从而允许清晰识别和显微切割包括肺在内的发育内胚层结构，并在体外培养期间成像。
|
|
|
| Mandibular Explant Assay for Investigating Extrinsic Stimuli on Bone and Cartilage Development
|
|
Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] A major issue in developmental biology is to determine how embryonic tissues respond to molecular signals in a timely manner and given the position-restricted instructions during morphogenesis, of which Meckel’s cartilage is a classical example. The ex-vivo explant model is a practical and convenient system that allows investigation of bone and cartilage responses to specific stimuli under a controlled manner that closely mimics the in vivo conditions. In this protocol, the explant model was applied to test whether Meckel’s cartilage and surrounding tissues are responsive to the Endothelin1 (Edn1) signaling molecule and whether it would rescue the phenotype of genetic mutations. The system allows a high degree of manipulation in terms of the concentrations of exogenous ...
[摘要] 发育生物学中的一个主要问题是确定胚胎组织如何及时响应分子信号，并且在形态发生期间给予位置限制指示，其中Meckel软骨是一个经典的例子。 体外外植体模型是一种实用且便利的系统，其允许以受控的方式调查对特定刺激的骨和软骨反应，所述方式严格模拟体内条件。 在这个协议中，外植模型被用来测试Meckel的软骨和周围组织是否对内皮素1（Edn1）信号分子有反应，以及是否会拯救基因突变的表型。 该系统允许在添加到外植体中的外源性化合物的浓度，关于测量下颌骨发育的时间点以及施用外源分子和致畸剂的方法方面进行高度的操作。
【背景】颅面畸形是人类最常见的先天性出生缺陷（Miettinen等人，1999）。许多这些畸形发生在面部形态发生期间，这是一个复杂的多步骤过程，其中颅神经嵴细胞迁移到咽弓以产生许多面部结构（Jin等人，2011）。
特定基因内的两种变异以及基因 - 基因相互作用都可能导致颅面变形。 IRF6基因突变导致头面部外胚层和上皮细胞的形成，导致唇裂，腭裂和下颌畸形。与 IRF6 相比， TWIST1 基因调节胚胎发育期间的神经管闭合和颅骨发育期间的颅缝融合。 TWIST1 ...
|
|
|