| Studying the Role of Microglia in Neurodegeneration and Axonal Regeneration in the Murine Visual System
|
|
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Microglia reside in the central nervous system (CNS) and are involved in the maintenance of the physiologic state. They constantly survey their environment for pathologic alterations associated with injury or diseases. For decades, researchers have investigated the role of microglia under different pathologic conditions, using approaches aiming to inhibit or eliminate these phagocytic cells. However, until recently, methods have failed to achieve complete depletion. Moreover, treatments often affected other cells, making unequivocal conclusions from these studies difficult. Recently, we have shown that inhibition of colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R) by oral treatment with PLX5622 containing chow enables complete depletion of retinal microglia and almost complete microglia ...
[摘要] 小胶质细胞存在于中枢神经系统（CNS）中，并参与维持生理状态。他们不断调查他们的环境，以寻找与受伤或疾病相关的病理改变。几十年来，研究人员使用旨在抑制或消除这些吞噬细胞的方法，研究了小胶质细胞在不同病理条件下的作用。然而，直到最近，方法未能实现完全耗尽。此外，治疗通常会影响其他细胞，因此难以从这些研究中得出明确的结论。最近，我们已经表明，通过用含有食物的PLX5622口服治疗抑制集落刺激因子1受体（CSF1R）能够完全消除视网膜小胶质细胞并且几乎完全消除视神经中的小胶质细胞，而不影响外周巨噬细胞或其他细胞。使用这种方法，我们研究了小胶质细胞在视网膜神经保护中的作用以及在不同条件下受损视神经中的轴突再生。因此，这里提出的这种有效，可靠和易于使用的方案将使研究人员能够明确地研究小胶质细胞对神经变性和轴突再生的贡献。该方案还可以容易地扩展到视觉系统中的急性和慢性损伤或疾病的其他范例。
【背景】 小胶质细胞是中枢神经系统（CNS）的常驻免疫细胞，其持续扫描其环境以进行病理改变（Nimmerjahn et al。，2005）。在检测到这种情况后，小胶质细胞转变为活化状态并向其进行不同任务的来源迁移（Kreutzberg，1996; Davalos et ...
|
|
|
| Sleeping Beauty Transposon-based System for Rapid Generation of HBV-replicating Stable Cell Lines
|
|
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] The stable HBV-transfected cell lines, which based on stable integration of replication-competent HBV genome into hepatic cells, are widely used in basic research and antiviral drug evaluation against HBV. However, previous reported strategies to generate HBV-replicating cell lines, which primarily rely on random integration of exogenous DNA by plasmid transfection, are inefficient and time-consuming. We newly developed an all-in-one Sleeping Beauty transposon system (denoted pTSMP-HBV vector) for robust generation of stable HBV-replicating cell lines of different genotype. The pTSMP-HBV vector contains HBV 1.3-copy genome and dual selection markers (mCherry and puromycin resistance gene), allowing rapid enrichment of stably-transfected cells via red fluorescence-activated cell sorting ...
[摘要] 稳定的HBV转染细胞系基于将复制能力的HBV基因组稳定整合到肝细胞中，广泛用于基础研究和针对HBV的抗病毒药物评估。然而，先前报道的产生HBV复制细胞系的策略（其主要依赖于通过质粒转染的外源DNA的随机整合）是低效且耗时的。我们新开发了一体化睡眠美容转座子系统（表示为pTSMP-HBV载体），用于稳定产生不同基因型的稳定HBV复制细胞系。 pTSMP-HBV载体含有HBV1.3拷贝基因组和双重选择标记（mCherry和嘌呤霉素抗性基因），允许通过红色荧光激活细胞分选和嘌呤霉素抗生素选择快速富集稳定转染的细胞。在该方案中，我们描述了构建HBV复制稳定细胞和系统评估这些细胞的HBV复制和病毒蛋白表达谱的详细程序。
【背景】慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染目前是一个主要的公共卫生负担，影响全球超过2.4亿人（Witt-Kehati et al。，2016）。慢性HBV患者患慢性活动性肝炎，肝硬化或原发性肝细胞癌（HCC）的风险升高（Schweitzer et al。，2015）。目前用干扰素-α或核苷类似物治疗并不能根除病毒，它们对清除乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的作用有限（Lucifora和Protzer，2016; Soriano et al。，2017） 。因此，迫切需要开发新的抗病毒抑制剂（Nassal，2015）。
用于评估新药抗HBV活性的细胞培养模型是新药开发的重要工具。稳定的HBV复制细胞系，携带复制能力的HBV基因组稳定整合到人肝癌细胞系（Huh7和/或HepG2）的基因组中，被广泛用于评估抗病毒药物的作用（Witt-Kehati ...
|
|
|
| Expansion of Airway Basal Cells and Generation of Polarized Epithelium
|
|
Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract] Airway basal stem cells are the progenitor cells within the airway that exhibit the capacity to self-renew and give rise to multiple types of differentiated airway epithelial cells. This stem cell-derived epithelium displays organized architecture with functional attributes of the airway mucosa. A protocol has been developed to culture and expand human airway basal stem cells while preserving their stem cell properties and capacity for subsequent mucociliary differentiation. This achievement presents a previously unrealized opportunity to maintain a durable supply of progenitor cells derived from healthy donors to differentiate into human primary airway epithelium for cellular and molecular-based studies. Further, basal stem cells can be harvested from patients with a specific airway ...
[摘要] 气道基底干细胞是气道内的祖细胞，表现出自我更新的能力并产生多种类型的分化的气道上皮细胞。这种干细胞来源的上皮细胞显示出具有气道粘膜功能属性的有组织的结构。已经开发了一种方案来培养和扩展人气道基底干细胞，同时保持其干细胞特性和后续粘液分泌的能力。这项成就提供了一个以前未实现的机会，以保持源自健康供体的祖细胞的持久供应，以分化为用于基于细胞和分子的研究的人原发性气道上皮。此外，基底干细胞可以从患有特定气道疾病的患者（例如囊性纤维化）中收集，从而能够在适当的气道粘膜环境下研究疾病特异性细胞的潜在改变的行为。在这里，我们详细描述了一系列气道基底干细胞系列扩增的方案，以实现几乎无限制的气道基底细胞的生成，这些细胞可以储存并随时用于随后的培养和分化。此外，我们描述了气液基底干细胞在空气 - 液体界面处的可渗透Transwell过滤器上的培养和分化，以创建功能性粘膜睫毛伪分层极化气道上皮粘膜。
【背景】气道疾病建模和药物发现已经从在气液界面（ALI）的可渗透Transwell过滤器上生长的原代呼吸道上皮培养物的开发和使用中获益。与永生化细胞系相比，该模型具有几个优点，即原代上皮细胞可以分化成具有多种上皮细胞类型（包括纤毛，浆膜和基底细胞）的气道粘膜，并且它们的排列在体内是相当反映的蜂窝组织。主要的ALI模型表现出功能性微生理过程，包括跳动纤毛和分泌粘液的能力，这些特征在细胞系衍生的上皮单层中显着不存在。此外，原代细胞不依赖于人工永生化或转化，因为细胞系来源的上皮细胞确实存在，因此不受细胞系中可能发生的错误信号传导的阻碍，这可能会错误地表示气道上皮中发生的过程。尽管有这些显着的限制，永生化细胞系被广泛用于模拟和研究气道上皮细胞，因为原发性气道上皮细胞存在自己的一系列挑战。原代上皮细胞在传代数次后无法复制，必须连续收获并分离以完成每组研究。另外，改变或缺失感兴趣基因表达的分子生物学技术难以实现，并且与原代上皮细胞一起维持。这些缺点造成成本和技术障碍，阻碍了原发性ALI培养物的广泛使用，尽管它们在调查气道粘膜方面有明显优势。 ...
|
|
|