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Fluoromount-G®

Company: SouthernBiotech
Catalog#: 0100-01
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Generation, Analyzing and in-vivo Drug Treatment of Drosophila Models with IBMPFD
Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract]  Missense mutations of p97/cdc48/Valosin-containing protein (VCP) cause inclusion body myopathy, Paget disease with frontotemporal dementia (IBMPFD) and other neurodegenerative diseases. The pathological mechanism of IBMPFD is not clear and there is no treatment. We generated Drosophila models of IBMPFD in adult flight muscle in vivo. Here we describe a variety of assays to characterize disease pathology and dissect disease mechanism, and the consequences of in vivo feeding of VCP inhibitors. [摘要]  [ 摘要] p97 / cdc48 / Valosin 含蛋白(VCP)的错义突变导致包涵体肌病,额颞叶痴呆的Paget病(IBMPFD)和其他神经退行性疾病。IBMPFD的病理机制尚不清楚,也没有治疗方法。我们生成了在成人体内飞行肌肉中IBMPFD的果蝇模型。在这里,我们描述了各种测定方法,以表征疾病病理和解剖疾病机制,以及体内VCP抑制剂的喂养后果。

[ 背景] VCP / p97 突变导致包涵体肌病,骨骼的Paget病和额颞叶性痴呆(IBMPFD),这是以常染色体显性方式在包括脑,肌肉和骨骼在内的多个系统中退化的疾病(Watts 等人,2004年) )。VCP的突变还与1-2%的散发性肌萎缩性侧索硬化症(ALS)以及遗传性痉挛性截瘫和Charcot-Marie-Tooth 2神经病有关(Abramzon 等,2012; de Bot 等,2012; Gonzalez 等,2014)。R155H突变是患者中最常见的突变,而具有A232E突变的个体具有最严重的临床表现(Kimonis 等,2008a; Ritson 等,2010)。90%的IBMPFD患者出现肌病,这是最早的症状(Weihl 等,2009)。50%的患者会发展成佩吉特氏骨病,影响头骨,脊柱,臀部和长骨。三分之一的患者发生额颞叶痴呆(Kimonis 等,2008b; Weihl ...

Expansion of Airway Basal Cells and Generation of Polarized Epithelium
Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract]  Airway basal stem cells are the progenitor cells within the airway that exhibit the capacity to self-renew and give rise to multiple types of differentiated airway epithelial cells. This stem cell-derived epithelium displays organized architecture with functional attributes of the airway mucosa. A protocol has been developed to culture and expand human airway basal stem cells while preserving their stem cell properties and capacity for subsequent mucociliary differentiation. This achievement presents a previously unrealized opportunity to maintain a durable supply of progenitor cells derived from healthy donors to differentiate into human primary airway epithelium for cellular and molecular-based studies. Further, basal stem cells can be harvested from patients with a specific airway ... [摘要]  气道基底干细胞是气道内的祖细胞,表现出自我更新的能力并产生多种类型的分化的气道上皮细胞。这种干细胞来源的上皮细胞显示出具有气道粘膜功能属性的有组织的结构。已经开发了一种方案来培养和扩展人气道基底干细胞,同时保持其干细胞特性和后续粘液分泌的能力。这项成就提供了一个以前未实现的机会,以保持源自健康供体的祖细胞的持久供应,以分化为用于基于细胞和分子的研究的人原发性气道上皮。此外,基底干细胞可以从患有特定气道疾病的患者(例如囊性纤维化)中收集,从而能够在适当的气道粘膜环境下研究疾病特异性细胞的潜在改变的行为。在这里,我们详细描述了一系列气道基底干细胞系列扩增的方案,以实现几乎无限制的气道基底细胞的生成,这些细胞可以储存并随时用于随后的培养和分化。此外,我们描述了气液基底干细胞在空气 - 液体界面处的可渗透Transwell过滤器上的培养和分化,以创建功能性粘膜睫毛伪分层极化气道上皮粘膜。

【背景】气道疾病建模和药物发现已经从在气液界面(ALI)的可渗透Transwell过滤器上生长的原代呼吸道上皮培养物的开发和使用中获益。与永生化细胞系相比,该模型具有几个优点,即原代上皮细胞可以分化成具有多种上皮细胞类型(包括纤毛,浆膜和基底细胞)的气道粘膜,并且它们的排列在体内是相当反映的蜂窝组织。主要的ALI模型表现出功能性微生理过程,包括跳动纤毛和分泌粘液的能力,这些特征在细胞系衍生的上皮单层中显着不存在。此外,原代细胞不依赖于人工永生化或转化,因为细胞系来源的上皮细胞确实存在,因此不受细胞系中可能发生的错误信号传导的阻碍,这可能会错误地表示气道上皮中发生的过程。尽管有这些显着的限制,永生化细胞系被广泛用于模拟和研究气道上皮细胞,因为原发性气道上皮细胞存在自己的一系列挑战。原代上皮细胞在传代数次后无法复制,必须连续收获并分离以完成每组研究。另外,改变或缺失感兴趣基因表达的分子生物学技术难以实现,并且与原代上皮细胞一起维持。这些缺点造成成本和技术障碍,阻碍了原发性ALI培养物的广泛使用,尽管它们在调查气道粘膜方面有明显优势。 ...

Preparation of Precisely Oriented Cryosections of Undistorted Drosophila Wing Imaginal Discs for High Resolution Confocal Imaging
Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract]  The combination of immunofluorescence and laser scanning confocal microscopy (LSM) is essential to high-resolution detection of molecular distribution in biological specimens. A frequent limitation is the need to image deep inside a tissue or in a specific plane, which may be inaccessible due to tissue size or shape. Recreating high-resolution 3D images is not possible because the point-spread function of light reduces the resolution in the Z-axis about 3-fold, compared to XY, and light scattering obscures signal deep in the tissue. However, the XY plane of interest can be chosen if embedded samples are precisely oriented and sectioned prior to imaging (Figure 1). Here we describe the preparation of frozen tissue sections of the Drosophila wing imaginal disc, which allows us to ... [摘要]  免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜(LSM)的组合是高分辨率检测生物样品中分子分布的关键。频繁的限制是需要在组织内或在特定的平面深处进行成像,这可能由于组织大小或形状而不可接近。因为与XY相比,光的点扩散函数将Z轴的分辨率降低了约3倍,并且光散射使组织中的深层信号模糊,所以不可能重新创建高分辨率3D图像。然而,如果嵌入的样品在成像之前被精确地定向和切片,则可以选择感兴趣的XY平面(图1)。在这里,我们描述的果蝇翅成像光盘的冰冻组织切片的准备,这使得我们能够获得高分辨率的图像,在整个这个折叠上皮的深度。

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图1.上皮结构和未畸变的折叠模式在发育果蝇翅膀的这个冰冻部分的整个深度中都被揭示出来。通过机翼囊横向背腹节。 A.冷冻切片显示贯穿上皮深度的信号的α-连环蛋白(A',A“,洋红色)的细胞核(A,绿色)和亚细胞分布。基底表面清晰可辨(箭头)。 A是“A的数字增强图像”。 B.在显示为XZ正交视图的自顶向下视图中收集的图像的Z-堆叠揭示了α-连环蛋白(B',B“)甚至数字增强图像(B”)的细胞核(B)但很少可辨别的细节。未能揭示基底上皮表面(箭头)。 ...

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