| Assessment of Caenorhabditis elegans Competitive Fitness in the Presence of a Bacterial Parasite
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Accurate measurements of an organism’s fitness are crucial for measuring evolutionary change. Methods of fitness measurement are most accurate when incorporating an individual’s survival and fecundity, as well as accounting for any ecological interactions or environmental effects experienced by the organism. Here, we describe a protocol for measuring the relative mean fitness of Caenorhabditis elegans populations, or strains, through an assay that accounts for individual survival, fecundity, and intraspecific competitive ability in the presence of a bacterial parasite. In this competitive fitness assay nematodes from a focal population or strain are mixed with a GFP-marked tester strain in equal proportions, the mixture of nematodes are then exposed to a parasite, and the ...
[摘要] 准确测量生物体的适应度对于衡量进化变化至关重要。当结合个体的生存和繁殖力以及考虑生物体所经历的任何生态相互作用或环境影响时，适合度测量的方法是最准确的。在这里，我们描述了一种用于测量秀丽隐杆线虫种群或菌株的相对平均适合度的方案，该方案通过在细菌寄生虫存在下计算个体存活率，繁殖力和种内竞争能力的测定。在这种竞争性适应性测定中，来自焦点种群或菌株的线虫与GFP标记的测试菌株以相等比例混合，然后将线虫的混合物暴露于寄生虫，并且通过测量来确定焦点菌株的相对竞争适合度。一代后，焦点线虫与GFP标记的线虫的比例发生变化。具体地，可以实施该协议以通过确定进化线虫与祖先线虫群体的相对竞争适合度来测量实验进化后线虫宿主适应度的变化。
【背景】 准确测量适应度和适应度随时间的变化对于确定群体对自然选择的反应至关重要。尽管如此，健康是众所周知难以衡量的，因为它包含了个人的生存，繁殖力，繁殖时间，并且必须考虑到对个体的生态和环境影响。尽管在所有可能的条件下没有用于测量适合度的协议是最佳的，但是考虑到生存和繁殖力的适应度的测量，同时保持生态和环境影响不变，可能提供对给定场景的适合性的可靠总体估计。在这里，我们描述了一个用于测量 C之间相对适应度差异的协议。线虫种群或菌株，用于确定细菌寄生虫存在时进化时间内相对适合度的变化。我们利用革兰氏阴性细菌粘质沙雷氏菌作为 ...
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| Preparation, Stimulation and Other Uses of Adult Rat Brain Synaptosomes
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Author:
Date:
2017-12-20
[Abstract] In this paper, our protocol for preparation of brain synaptosomes is described. Synaptosomes are a valuable model system for analysis of structural components of the synapse as well as for investigation of synaptic function. Synaptosomal preparations are necessary for understanding molecular changes at synapses where critical post-translational modifications of synaptic proteins may occur. Not only are synaptosomes rich in synaptic proteins, but they can be used for analyzing uptake of neurotransmitters into synaptic vesicles and for analysis of the involvement of neurotransmitter synthesis and release. Synaptosomes can be stimulated with increased calcium influx to release neurotransmitters. Synaptosomal preparations have been used in characterizing calcium dependent phosphorylation and ...
[摘要] 在这篇论文中，我们描述了制备脑突触体的方案。突触体是用于分析突触的结构组分以及用于调查突触功能的有价值的模型系统。突触体制备对于理解可能发生突触蛋白的关键翻译后修饰的突触处的分子变化是必需的。突触小体不仅含有丰富的突触蛋白，还可用于分析神经递质向突触小泡的摄取和神经递质合成和释放的参与分析。可以用增加的钙内流刺激突触体释放神经递质。突触体制剂已被用于表征钙依赖性磷酸化和GABA合成酶GAD65（分子量为65kDa的L-谷氨酸脱羧酶）的活化。通过检查从突触体制剂获得的突触小泡膜上的蛋白质复合物，可以表征GAD65在GABA囊泡释放的偶联合成和囊泡摄取中的作用，这最终导致GABA囊泡释放GABA能神经传递的微调方法。
【背景】突触体制备方法在40多年前在神经科学研究实验室中建立，并且在涉及神经递质释放相关的细胞外钾升高以及对细胞内钙增加的应答方面具有极大的价值。除了阐明神经递质释放的过程之外，突触体制剂已经成为突触囊泡的有价值的来源。关于突触小泡的研究已经被用于表征参与偶联的神经递质合成和囊泡释放的蛋白质组分。突触体制剂作为突触囊泡分离的中间体也是非常有价值的，然后根据位于包含神经递质合成酶的囊泡膜上的蛋白质复合物进行分析。在这方面关键的意义在于包括CSP（胱氨酸 - ...
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