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Gilson pipettes

Company: Scientific Laboratory Supplies
Catalog#: F123601
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Stopped-flow Light Scattering Analysis of Red Blood Cell Glycerol Permeability
Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract]  Stopped-Flow Light Scattering (SFLS) is a method devised to analyze the kinetics of fast chemical reactions that result in a significant change of the average molecular weight and/or in the shape of the reaction substrates. Several modifications of the original stopped-flow system have been made leading to a significant extension of its technical applications. One of these modifications allows the biophysical characterization of the water and solute permeability of biological and artificial membranes.

Here, we describe a protocol of SFLS to measure the glycerol permeability of isolated human red blood cells (RBCs) and evaluate the pharmacokinetics properties (selectivity and potency) of isoform-specific inhibitors of AQP3, AQP7 and AQP9, three mammalian aquaglyceroporins ...
[摘要]  [摘要] 停流光散射(SFLS)是一种用于分析快速化学反应动力学的方法,该化学反应导致平均分子量和/或反应底物形状发生显着变化。已对原始停流系统进行了几处修改,从而大大扩展了其技术应用范围。这些修饰之一允许水的生物物理表征以及生物膜和人造膜的溶质渗透性。

在这里,我们描述了一种SFLS协议,用于测量分离的人红细胞(RBC)的甘油渗透性,并评估AQP3,AQP7和AQP9的同种型特异性抑制剂的药代动力学特性(选择性和效价),这三种哺乳动物的水甘油糖蛋白允许转运甘油跨膜。在20°C的SFLS设备中,将RBC的悬浮液(1%的血细胞比容)暴露于100 mM甘油的向内定向,并在530 nm的单色波长下记录120 s的散射光强度变化。该设备的死区时间为1.6毫秒,混合效率在不到1毫秒的时间内达到99%。数据拟合到单指数函数和有关的时间constan 吨( ,对应于伴随甘油的进入红细胞的水渗透运动的光散射的细胞膨胀相的秒)进行测定。RBC 的甘油渗透系数(P gly ,cm / s)通过以下公式计算:



P gly = 1 / [[((S / V) ]



其中 (s)是拟合的指数时间常数,S / V是分析的RBC 样本的表面积与体积之比(cm -1 ...

A CRISPR Competition Assay to Identify Cancer Genetic Dependencies
Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract]  The CRISPR/Cas9 system is a powerful tool for genome editing, wherein the RNA-guided nuclease Cas9 can be directed to introduce double-stranded breaks (DSBs) at a targeted locus. In mammalian cells, these DSBs are typically repaired through error-prone processes, resulting in insertions or deletions (indels) at the targeted locus. Researchers can use these Cas9-mediated lesions to probe the consequences of loss-of-function perturbations in genes of interest. Here, we describe an optimized protocol to identify specific genes required for cancer cell fitness through a CRISPR-mediated cellular competition assay. Identifying these genetic dependencies is of utmost importance, as they provide potential targets for anti-cancer drug development. This protocol provides researchers with a robust ... [摘要]  [摘要] CRISPR / Cas9系统是用于基因组编辑的强大工具,其中RNA引导的核酸酶Cas9可以直接在目标基因座处引入双链断裂(DSB)。在哺乳动物细胞中,这些DSB通常通过容易出错的过程进行修复,从而导致在目标基因座处插入或缺失(indel)。研究人员可以使用这些Cas9介导的病变来探究结果目标基因的功能丧失扰动。在这里,我们描述了一种优化的协议,可通过CRISPR介导的细胞竞争测定法来鉴定癌细胞适应性所需的特定基因。鉴定这些遗传依赖性至关重要,因为它们为抗癌药物的开发提供了潜在的靶标。该协议为研究人员提供了一种强大且可扩展的方法,以研究多种细胞系和癌症类型中的基因依赖性,并验证高通量或全基因组筛选的结果。

[背景] CRISPR / Cas9系统被认为已发展成为一种适应性的原核病毒防御系统(Mojica 等,2005; Makarova 等,2006)。它被发现后不久,就被研究人员选中,并进行了基因组编辑以供实验室使用(Doudna和Charpentier,2014年; Hsu 等人,2014年)。通过转基因表达Cas9核酸酶以及与靶序列互补的短链RNA(sgRNA),可以将双链断裂(DSB)引入各种细胞和生物体的目标位点(Cong 等,2013)。 ...

Quantification of Bacteria Residing in Caenorhabditis elegans Intestine
Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract]  Quantification of intestinal colonization by pathogenic or commensal bacteria constitute a critical part of the analysis to understand host-microbe interactions during different time points of their interplay. Here we detail a method to isolate non-pathogenic and pathogenic bacteria from C. elegans intestines, and classify gut phenotypes induced by bacterial pathogens using fluorescently-tagged bacteria. Furthermore, these methods can be used to isolate and identify new culturable bacterial species from natural microbiomes of wild nematodes. [摘要]  [ 摘要] 量化中肠道定植通过致病或者共生细菌构成一个关键部分中的分析要了解主机微生物相互作用在不同的时间点中他们的相互作用。在这里我们详细介绍一个方法要隔离非致病性和致病性细菌从C. 线虫 肠,而且分类肠表型诱导由细菌病原体使用荧光标记的细菌。此外,这些方法可以被用于为了隔离和识别新的可培养的细菌种类从天然微生物组中野生线虫。

[ 背景] 在该野生,线虫是否暴露为一宽品种中细菌和真菌群落(Frezal 而菲利克斯,2015年)。在实验室条件下,该线虫C. 线虫已被历史维护在一个单一食物源(布伦纳,1974年)。^ h H但是,该蠕虫被冲击下随着各种致病菌和一个增加数中的非- 病原细菌中多样化的营养质量(Garsin 的Et 铝,。2003 ; Gracida 而Eckmann,2013 ; 德克森的Et 铝,。2016 ; 麦克尼尔的Et 铝。,2013 ; 谭的Et 铝,1999年)。C. 线虫胚胎能要提取从妊娠雌雄同体通过使用次氯酸钠处理。这个过程省去细菌允许的新世代要被暴露游记要一个微生物吨。他的优势提供了一个独特的框架为了研究宿主与微生物相互作用。遗传易处理中的线虫和细菌允许为了研究真核生物(Garsin 的Et 铝,2003)和原核(加拉格尔和Manoil,2001)基因功能在不同的时间点在这个动态 相互作用。

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