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Date:
2017-11-20
[Abstract] The bioluminescence resonance energy transfer (BRET) assay can be used as an indicator of molecular approximation and/or interaction. A significant resonance energy transfer signal is generated when the acceptor, having the appropriate spectral overlap with the donor emission, is approximated with the donor. In the example provided, proteins tagged with bioluminescent Renilla luciferase (Rlu) as donor and yellow fluorescent protein (YFP) as acceptor were co-expressed in cells. This pair of donor and acceptor have an approximate Förster distance of 4.4 nm, providing the optimal working distance (Dacres et al., 2010). This technique can be used to explore the time-course of specific molecular interactions that occur in living cells.
[摘要] 生物发光共振能量转移（BRET）测定可以用作分子近似和/或相互作用的指标。 当具有与供体发射的适当光谱重叠的受体与供体近似时，产生显着的共振能量转移信号。 在所提供的例子中，用生物发光的海肾荧光素酶（Rlu）作为供体和作为受体的黄色荧光蛋白（YFP）标记的蛋白在细胞中共表达。 这对供体和受体具有4.4nm的近似Forster距离，提供了最佳的工作距离（Dacres et。，2010）。 这种技术可以用来探索在活细胞中发生的特定分子相互作用的时间过程。
【背景】使用生物发光供体和荧光受体的生物发光共振能量转移（BRET）研究可以监测在活细胞中实时发生的分子相互作用（例如标记的蛋白质，肽或小分子之间）。这种方法取决于供体和受体之间的空间近似，以及适当的光谱重叠以产生有意义的信号（图1）。目前提供的实例使用Rlu-标记的蛋白质作为供体和YFP-标记的蛋白质作为受体（Harikumar等人，2007）。这已被非常成功地应用于建立活细胞质膜中生理相关的蛋白质 - 蛋白质相互作用的存在。然而，重要的是包括可能导致非特异性蛋白质 - 蛋白质近似和能量转移（旁观者效应）的表达水平的对照，例如使用相似水平的已知非相关蛋白质的表达。此外，与未标记蛋白质的竞争可以帮助建立信号的相互作用的可饱和性和特异性。
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