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Date:
2017-11-05
[Abstract] Human cytomegalovirus (HCMV) infection is a major cause of morbidity and mortality in transplant patients and a leading cause of congenital birth defects (Saint Louis, 2016). Vaccination and therapeutic studies often require scalable cell culture production of wild type virus, represented by clinical isolates. Obtaining sufficient stocks of wild-type clinical HCMV is often labor intensive and inefficient due to low yield and genetic loss, presenting a barrier to studies of clinical isolates. Here we report a bioreactor method based on continuous infection, where retinal pigment epithelial (ARPE-19) cells adhered to microcarrier beads are infected in a bioreactor and used to produce high-titers of clinical isolate HCMV that maintain genetic integrity of key viral tropism factors and the ...
[摘要] 人类巨细胞病毒（HCMV）感染是移植患者发病率和死亡率的主要原因，并且是先天性先天缺陷的主要原因（Saint Louis，2016）。接种疫苗和治疗性研究通常需要以临床分离物为代表的野生型病毒的可扩展的细胞培养生产。获得充足的野生型临床HCMV库存往往是劳动密集型的，由于产量低和遗传损失效率低下，对临床分离物的研究构成障碍。在这里，我们报告了一种基于连续感染的生物反应器方法，其中在生物反应器中感染粘附到微载体珠上的视网膜色素上皮（ARPE-19）细胞并用于产生维持关键病毒嗜性因子的遗传完整性的高滴度临床分离株HCMV和病毒基因组。在该生物反应器中，通过定期加入未感染的ARPE-19细胞可以维持末期感染，提供了10 7 -10 -8 pfu / ml浓缩的方便的制备TB40 / E IE2-EYFP库存无需日常细胞传代或胰蛋白酶消化。总的来说，与传统的静态培养板相比，这代表病毒产量增加了100倍的100倍，同时需要90％的处理时间。此外，这种连续的感染环境有可能监测感染动态，并可以实时跟踪病毒的进化。
【背景】先天性巨细胞病毒感染是导致出生缺陷的主要原因，仅在美国，每年的直接成本就高达10亿美元，并代表了全球未得到满足的医疗需求（Bristow等人，2011; Griffiths 2013; Manicklal等人，2013; Saint ...
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