| Magnet-assisted Flow Cytometry of in vivo Tumors to Quantitate Cell-specific Responses to Magnetic Iron Oxide Nanoparticles
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Author:
Date:
2020-11-20
[Abstract] A clear understanding of nanoparticle interactions with living systems at the cellular level is necessary for developing nanoparticle-based therapeutics. Magnetic iron oxide nanoparticles provide unique opportunities to study these interactions because of their responsiveness to magnetic fields. This enables sorting of cells containing nanoparticles from in vivo models. Once sorted, flow cytometry can identify individual cell types, which can be further analyzed for iron content, gene or protein expression changes associated with nanoparticle uptake, and for other biological responses at a molecular level. Here we provide a detailed protocol to sort and identify cells in the tumor microenvironment that have internalized magnetic iron oxide nanoparticles following intravenous ...
[摘要] [摘要] 在开发基于纳米颗粒的治疗方法时，必须对纳米颗粒与生物系统在细胞水平上的相互作用有一个清晰的了解。磁性氧化铁纳米颗粒因其对磁场的响应性而提供了研究这些相互作用的独特机会。这使得能够从体内模型中筛选出包含纳米颗粒的细胞。排序后，流式细胞仪可以识别单个细胞类型，然后可以进一步分析其铁含量，与纳米颗粒摄取相关的基因或蛋白质表达变化以及分子水平的其他生物学反应。在这里，我们提供了详细的协议，用于在静脉内给药后分类和鉴定肿瘤微环境中具有内在磁性氧化铁纳米颗粒的细胞。
[背景]几种基于纳米颗粒的抗癌药物已在临床上使用，因为它们已显示出对诊断，抗癌药物传递和热疗的安全性和有效性（Marchal等，2015 ；Wu等，2015）。然而，在我们对癌症纳米医学的理解上仍然存在重大差距，主要是因为纳米颗粒与免疫细胞之间相互作用的细节仍然未知。其他人和我们已经将纳米粒子免疫细胞的相互作用确定为影响体内纳米粒子命运和在肿瘤中保留的关键变量（Sheen等人，2014；Zanganeh等人，2016； ...
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| The RiboPuromycylation Method (RPM): an Immunofluorescence Technique to Map Translation Sites at the Sub-cellular Level
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Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] While isotopic labeling of amino acids remains the reference method in the field for quantifying translation rate, it does not provide any information on spatial localization of translation sites. The rationale behind developing the ribopuromycylation method (RPM) was primarily to map translation sites at the sub-cellular level while avoiding detection of newly synthesized proteins released from ribosomes. RPM visualizes actively translating ribosomes in cells via standard immunofluorescence microscopy in fixed and permeabilized cells using a puromycin-specific monoclonal antibody to detect puromycylated nascent chains trapped on ribosomes treated with a chain elongation inhibitor.
[摘要] 尽管氨基酸的同位素标记仍然是用于定量翻译速率的领域中的参考方法，但是其不提供关于翻译位点的空间定位的任何信息。 开发ribopuromycylation方法（RPM）的基本原理主要是在亚细胞水平上绘制翻译位点，同时避免检测从核糖体释放的新合成的蛋白质。 RPM通过使用嘌呤霉素特异性单克隆抗体的固定的和透化的细胞中的标准免疫荧光显微镜可视化主动翻译细胞中的核糖体以检测捕获在用链延长抑制剂处理的核糖体上的嘌呤化新生链。
【背景】几十年来，氨基酸的同位素标记被认为是研究蛋白质翻译的金标准。虽然这种方法已被证明是非常准确的评估翻译率，它没有提供翻译核糖体的位置信息。最近，氨基酸类似物使荧光检测新生链（Dieterich等人，2007）。然而，几乎所有检测到的信号都来自核糖体释放的多肽。我们最初的想法是开发一种方法来标记新生链，同时还束缚于翻译核糖体。
嘌呤霉素（PMY）是一种氨基糖苷类抗生素，模拟带电荷的tRNA Tyr并掺入核糖体A位点。因此，PMY通过核糖体催化 - ...
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