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Date:
2020-11-05
[Abstract] The Xenopus oocyte is a powerful system for the exogenous expression and functional characterization of plant membrane transport proteins. Until now, a number of potassium transporters and channels have been identified in oocytes expression system by the two-electrode voltage clamp technology. It is difficult to characterize K+/H+ anti-transporters, especially, electroneutral transporter. The K+ efflux assay system enables easy, fast, large-scale measurement of the transporters activity without two-electrode voltage clamp technology. This protocol describes a technique to measure the efflux activity of potassium transporter in oocytes expressing system.
[摘要] [摘要]爪蟾卵母细胞是针对外源表达和植物膜转运蛋白的功能表征一个强大的系统。迄今为止，通过两电极电压钳技术已经在卵母细胞表达系统中发现了许多钾转运蛋白和钾通道。很难表征K + / H +反转运蛋白，尤其是电中性转运蛋白。K +外排测定系统无需两电极电压钳技术即可轻松，快速，大规模地测量转运蛋白的活性。该协议描述了一种测量卵母细胞表达系统中钾转运蛋白外排活性的技术。
[背景[非洲爪蟾卵母细胞中积累了酶，蛋白质和细胞器，这些都可以被利用来生产大量，正确翻译后修饰，正确定点的外来蛋白质（Miller and Zhou，2000）。因此，卵母细胞通过使用两电极电压钳技术提供了一种有效的表达系统，以功能上表征植物膜蛋白。在卵母细胞中表达的第一个植物钾转运蛋白是K +通道（Cao等，1992）。此后，大部分钾通道和转运已经在卵母细胞的研究（Schachtman等人，1994; V é RY等人，1994; Wang和吴，2013年）。但是一些K + / H +反转运蛋白是电中性的，两电极电压钳技术无法表征这些转运蛋白。为了克服这个问题，我们采用了一种新的方法来确定这些转运蛋白的活性，方法是测量孵育前后培养基中钾含量的变化。细胞内ķ +浓度为约70 - 150mM的（韦伯，1999年）。由表达的K +转运蛋白介导的K +外排可引起细胞内和细胞外K ...
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