| Bioorthogonal Labeling and Chemoselective Functionalization of Lung Extracellular Matrix
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Decellularized extracellular matrix (ECM) biomaterials derived from native tissues and organs are widely used for tissue engineering and wound repair. To boost their regenerative potential, ECM biomaterials can be functionalized via the immobilization of bioactive molecules. To enable ECM functionalization in a chemoselective manner, we have recently reported an effective approach for labeling native organ ECM with the click chemistry-reactive azide ligand via physiologic post-translational glycosylation. Here, using the rat lung as a model, we provide a detailed protocol for in vivo and ex vivo metabolic azide labeling of the native organ ECM using N-Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated (Ac4GalNAz), together with procedures for decellularization and labeling characterization. Our ...
[摘要] [摘要]源自天然组织和器官的脱细胞细胞外基质（ECM）生物材料被广泛用于组织工程和伤口修复。为了增强其再生潜力，可以通过固定生物活性分子来使ECM生物材料功能化。为了使ECM以化学选择性的方式实现功能化，我们最近报告了一种有效的方法，可通过生理学上的翻译后糖基化，用点击化学反应的叠氮化物配体标记天然器官ECM 。在此，使用大鼠肺为模型，我们提供一种用于详细方案在体内和离体代谢叠氮化物使用N- Azidoacetylgalactosamine-tetraacylated天然器官ECM的标记（AC 4GalNAz），以及用于脱细胞和标记表征的程序。我们的方法可以在体内三天内或离体器官培养期间的一天之内进行特异性而稳定的ECM标记。脱细胞后，所得的ECM标记保持稳定。通过我们的方法，ECM生物材料可以用所需的炔烃修饰的生物分子（例如生长因子和糖胺聚糖）进行功能化，以用于组织工程和再生应用。
关键字：细胞外基质，脱细胞，生物正交，化学选择性功能化，点击化学，肺
[背景]细胞外基质（ECM）是由特定组织或器官的非细胞成分组成的水合网络支架，在通过其所包含的生物活性成分（例如纤维蛋白，生长）支持住宅细胞的活动中起关键作用。因子和糖胺聚糖（GAG）（Theocharis et ...
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| Quantitative Kinetic Analyses of Histone Turnover Using Imaging and Flow Cytometry
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Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract] Dynamic histone changes occur as a central part of chromatin regulation. Deposition of histone variants and post-translational modifications of histones are strongly associated with properties of chromatin status. Characterizing the kinetics of histone variants allows important insights into transcription regulation, chromatin maintenance and other chromatin properties. Here we provide a protocol of quantitative and sensitive approaches to test the timing of incorporation and dissociation of histones using a two-color SNAP-labeling system, labelling pre-existing and newly-incorporated histones distinctly. Together with cell cycle synchronization methods and cell cycle markers, this approach enables a pulse-chase analysis to determine the turnover of histone variants during the cell cycle, ...
[摘要] [摘要] 动态的组蛋白变化是染色质调节的核心部分。组蛋白变体的沉积和组蛋白的翻译后修饰与染色质状态的属性密切相关。表征组蛋白变体的动力学特性可为深入了解转录调控，染色质维持和其他染色质特性提供重要信息。在这里，我们提供了一种定量和敏感方法的协议，以使用双色SNAP标记系统测试组蛋白的结合和解离时间，分别标记预先存在的和新结合的组蛋白。结合细胞周期同步方法和细胞周期标志物，这种方法可以进行脉冲追踪分析，以确定在细胞周期内使用成像或流式细胞仪方法以单细胞分辨率检测到的组蛋白变体的周转率。除了测试整体组蛋白更新，还可以使用成像方法解决组蛋白变体的细胞周期依赖性细胞定位。
[背景] 染色质重塑是真核细胞众多基本细胞活动的一部分（Geiman 和Robertson，2002；Clapier 和Cairns ，2009）。转录因子和RNA聚合酶的可及性通常与DNA甲基化和染色质状态的变化相关，包括可及性，翻译后的组蛋白修饰和组蛋白变体的沉积。组蛋白变体差异性地调节调节发育，细胞分化或其他生理活动的基因表达（Banaszynski 等，2010）。它们在DNA修复，端粒维护，异染色质形成和染色质分离中也发挥着不同的作用（Henikoff 和Smith，2015； Zink和Hake，2016）。此外，组蛋白变体的掺入失调与癌症有关（Vardabasso et ...
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| Analysis of Generalized Fibrosis in Mouse Tissue Sections with Masson’s Trichrome Staining
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Expansion of fibrous connective tissue and abnormal deposition of extracellular matrix (ECM) are at the basis of many fibrotic diseases. Fibrosis can occur in response to both physiological and pathological cues, including wound healing, tissue remodeling/repair and inflammation. Chronic fibrosis can lead to severe tissue damage, organ failure and death. Assessing the extent of organ fibrosis is crucial for accurate diagnosis of this condition. The use of Masson’s trichrome staining of tissue sections from skeletal muscle is a fast method for detection of morphological alterations indicative of a fibrotic phenotype in this organ. This staining method detects the extent of collagen fibers deposition and, because it employs the combination of three dyes, can also distinguish muscle fibers ...
[摘要] [摘要 ] 纤维结缔组织扩张和细胞外基质异常沉积是许多纤维化疾病的基础。纤维化可响应生理和病理学提示而发生，包括伤口愈合，组织重塑/修复和炎症。慢性纤维化可导致严重的组织损伤，器官衰竭甚至死亡。评估器官纤维化的程度对于准确诊断这种情况至关重要。使用Masson的骨骼肌组织切片进行三色染色是检测指示该器官纤维化表型的形态学改变的快速方法。这种染色方法可检测胶原纤维的沉积程度， 因为它使用三种染料的组合，所以还可以同时区分肌肉纤维（红色）和胶原蛋白（蓝色）和细胞核（黑色）。
[背景] 纤维化是由于慢性炎症，组织损伤/重塑（例如，化学或放射疗法后），持续感染，自身免疫性疾病，过敏反应和癌症而在器官中形成过多的纤维结缔组织。在此过程中，包括胶原蛋白在内的过多的细胞外基质（ECM）成分会沉积并积聚。如果进展，纤维化将变成慢性，最终导致器官衰竭甚至死亡（Rockey 等，2015）。塞弗拉尔类型的纤维化疾病在人类，很多都是未知病因进行了描述。通常受影响的器官是肺，肾，肝，心脏和骨骼肌（Hinderer 等人，2019年; Majo 等人，2019年; Mahdy，2019年）。例如，特发性肺纤维化是与肺组织瘢痕形成有关的常见，进行性和致命性疾病，会逐渐失去充氧能力，导致患者无法正常呼吸（Lederer 等人，2018）。
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