| In-vitro GLP-1 Release Assay Using STC-1 Cells
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] Enteroendocrine cells (EECs) are known chemosensors in the gastrointestinal (GI) epithelium. They release a diversity of gut hormones in response to various stimuli. Here, we report an in-vitro assay to measure GLP-1 release from cultured murine EEC’s under fatty acid stimulation.
[摘要] [摘要] 肠内分泌细胞（EEC）是胃肠道（GI）上皮中的已知化学传感器。它们响应各种刺激而释放多种肠激素。在这里，我们报告了一种体外测定法，以测量在脂肪酸刺激下培养的鼠EEC中GLP-1的释放。
[背景] 肠上皮是人体与环境之间最大的界面。该界面由单个上皮层组成，包含多个具有独特功能角色的不同细胞类型。与LGR5阳性上皮干细胞不同，肠内分泌细胞（EEC）沿整个胃肠道散布在整个上皮中。EEC通过产生和分泌多种激素，在对营养和其他刺激的反应中起关键作用。传统上，这些细胞是按照荷尔蒙特征来分类的（Nausheen 等人，2013； Latorre 等人，2016； Verhoeckx 等人，2015a），尽管随着单细胞RNA测序的到来，我们逐渐意识到这些细胞中的大多数分泌多种激素（Haber 等人，2017; Billing 等人，2019）。EEC的亚型L细胞由胰高血糖素样肽1和2（GLP-1和GLP-2）的产生定义，也可能分泌YY肽（PYY）和胰岛素样肽5（INSL5） 。大多数L细胞见于回肠末端和结肠，而另一些也见于十二指肠和空肠近端。L细胞表面的受体使它们能够直接感知管腔成分并产生适当的激素反应。L细胞上最显着的营养成分和食物成分受体是经典的味觉受体，游离脂肪酸受体以及蛋白质及其产物的受体（Drucker 和Nauck ，2006年；Furness ...
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| Metabolomic and Lipidomic Analysis of Bone Marrow Derived Macrophages
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Macrophages are highly plastic immune cells that are capable of adopting a wide array of functional phenotypes in response to environmental stimuli. The changes in macrophage function are often supported and regulated by changes in cellular metabolism. Capturing a comprehensive picture of metabolism is vital for understanding the role of metabolic rewiring in the immune response. Here we present a method for systematically quantifying the abundance of metabolites and lipids in primary murine bone marrow derived macrophages (BMDMs). This method simultaneously extracts polar metabolites and lipids from BMDMs using a rapid two-phase extraction procedure. The polar metabolite fraction and lipid fraction are subsequently analyzed by separate liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) ...
[摘要] [摘要] 巨噬细胞是高度可塑性的免疫细胞，能够对环境刺激产生广泛的功能表型。巨噬细胞功能的改变通常受到细胞代谢的支持和调节。获取新陈代谢的全面图像对于理解代谢重组在免疫反应中的作用至关重要。本文提出了一种系统定量测定小鼠骨髓源性巨噬细胞（BMDMs）中代谢物和脂质丰度的方法。该方法采用快速两相萃取法同时从BMDMs中提取极性代谢物和脂质。极性代谢物部分和脂质部分随后通过单独的液相色谱-质谱（LC-MS）方法进行分析，以优化覆盖率和定量。这使得对细胞代谢的全面表征可以用来理解各种环境刺激对巨噬细胞代谢和功能的影响。
[背景] 巨噬细胞是先天性免疫系统的细胞，在局部微环境中对信号作出反应时，可采用多种功能表型。巨噬细胞的激活与细胞代谢的特定重编程相结合并高度依赖（Tannahill et al.，2013；Galván-Peña and O'Neill，2014；Jha et al.，2015；Kelly and O'Neill，2015；Cordes et al.，2016；Mills and O'Neill 2016；等人；Mills et al.，2016；Liu et al.，2013；Lampropoulou et al.，2016；Van den ...
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| Measuring CD38 Hydrolase and Cyclase Activities: 1,N6-Ethenonicotinamide Adenine Dinucleotide (ε-NAD) and Nicotinamide Guanine Dinucleotide (NGD) Fluorescence-based Methods
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] CD38 is a multifunctional enzyme involved in calcium signaling and Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD+) metabolism. Through its major activity, the hydrolysis of NAD+, CD38 helps maintain the appropriate levels of this molecule for all NAD+-dependent metabolic processes to occur. Due to current advances and studies relating NAD+ decline and the development of multiple age-related conditions and diseases, CD38 gained importance in both basic science and clinical settings. The discovery and development of strategies to modulate its function and, possibly, treat diseases and improve health span put CD38 under the spotlights. Therefore, a consistent and reliable method to measure its activity and explore its use in medicine is required. We ...
[摘要] CD38是参与钙信号传导和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD + ）代谢的多功能酶。通过其主要活性，NAD + 的水解，CD38有助于维持该分子的适当水平，从而发生所有NAD + 依赖性代谢过程。由于目前有关NAD + 下降和多种年龄相关疾病和疾病发展的研究和进展，CD38在基础科学和临床环境中都具有重要意义。调整其功能，可能治疗疾病和改善健康状况的战略的发现和发展使CD38成为焦点。因此，需要一种一致且可靠的方法来测量其活性并探索其在医学中的用途。我们在这里描述了我们的小组如何测量CD38的水解酶和环化酶活性的方法，利用基于荧光的酶测定法在平板阅读器中使用1，N 6 -Ethenonicotinamide Adenine Dinucleotide（ε-NAD）进行）和烟酰胺鸟嘌呤二核苷酸（NGD）分别作为底物。
【背景】目前关于代谢功能障碍和虚弱的年龄相关发展的研究每天都有更多的证据。众所周知，随着老化的进行，NAD + 水平在预期过程中降低。最近的研究表明，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD + ）的减少与年龄相关的代谢下降有关（Massudi et al。，2012）。增加NAD + 水平体内，导致延长寿命和健康跨度相关因素的活化，并改善衰老的几个生理和代谢参数（Camacho-Pereira ...
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