| Optogenetic Tuning of Protein-protein Binding in Bilayers Using LOVTRAP
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Author:
Date:
2020-09-05
[Abstract] Modern microscopy methods are powerful tools for studying live cell signaling and biochemical reactions, enabling us to observe when and where these reactions take place from the level of a cell down to single molecules. With microscopy, each cell or molecule can be observed both before and after a given perturbation, facilitating better inference of cause and effect than is possible with destructive modes of signaling quantitation. As many inputs to cell signaling and biochemical systems originate as protein-protein interactions near the cell membrane, an outstanding challenge lies in controlling the timing, location and the magnitude of protein-protein interactions in these unique environments. Here, we detail our procedure for manipulating such spatial and temporal protein-protein ...
[摘要] [摘要] 现代显微镜方法是研究活细胞信号转导和生化反应的强大工具，使我们能够观察这些反应的时间和位置，从细胞水平到单个分子。利用显微镜，可以在给定的扰动之前和之后观察每个细胞或分子，比起破坏性的信号定量方法，可以更好地推断因果关系。由于细胞信号传导和生化系统的许多输入源于细胞膜附近的蛋白质-蛋白质相互作用，因此一个巨大的挑战在于控制时间，位置 以及这些独特环境中蛋白质与蛋白质相互作用的程度。在这里，我们详细介绍了在封闭的显微镜系统中使用这种基于时空的蛋白质-蛋白质相互作用系统，在支持的脂质双分子层上使用基于LOVTRAP的光反应性蛋白质-蛋白质相互作用系统的程序。系统可以在几秒钟内做出响应，并且可以将细节图案化到1微米级别。我们使用了该技术来解锁T细胞信号传导的基本方面，并且该方法可推广到许多其他细胞信号传导和生化环境。
背景技术细胞信号传导和细胞生物学中的问题通常集中在细胞如何感知和响应其环境上。进行这些细胞决定的信号级联反应包含的蛋白质可以在几秒钟到几分钟的时间内将纳米级移动到微米级。某些常用方法，例如蛋白质印迹，qPCR ...
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| Magnetic Resonance Imaging and Histopathological Visualization of Human Dural Lymphatic Vessels
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] In this protocol, we describe a method to visualize and map dural lymphatic vessels in-vivo using magnetic resonance imaging (MRI) and ex-vivo using histopathological techniques. While MRI protocols for routine imaging of meningeal lymphatics include contrast-enhanced T2-FLAIR and T1-weighted black-blood imaging, a more specific 3D mapping of the lymphatic system can be obtained by administering two distinct gadolinium-based MRI contrast agents on different days (gadofosveset and gadobutrol) and subsequently processing images acquired before and after administration of each type of contrast. In addition, we introduce methods for optimal immunostaining of lymphatic and blood vessel markers in human dura mater ex-vivo.
[摘要] 在该协议中，我们描述了一种使用组织病理学技术使用磁共振成像（MRI）和体外可视化和绘制硬膜淋巴管体内的方法。 虽然用于脑膜淋巴管的常规成像的MRI方案包括对比增强的T2-FLAIR和T1加权的黑血成像，但是可以通过在不同日期施用两种不同的基于钆的MRI造影剂来获得更具体的淋巴系统3D图谱 （gadofosveset和钆布醇）并且随后处理在施用每种类型的对比之前和之后采集的图像。 此外，我们介绍了在人体硬脑膜内进行淋巴和血管标志物最佳免疫染色的方法。
【背景】在大脑免疫特权的原因是没有实质淋巴管。 然而，最近的研究发现了啮齿动物硬脑膜中广泛的淋巴循环系统（Aspelund等人，2015; Louveau等人，2015），提供了可能的途径 用于消除大脑的废物和免疫细胞进入深部颈部淋巴结。 在这个协议中，我们描述了一种方法来：（1）使用MRI的头部显示硬脑膜内的淋巴管体内，和（2）使用优化评估淋巴管的局部存在 免疫染色方法（Absinta等人，2017）。 淋巴管的体内成像可以更详细地研究废物清除和免疫功能的机制及其在各种疾病和衰老中的潜在异常。
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