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Incubator

Company: Hucoa-Herlös
Catalog#: 3111
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Expansion of Airway Basal Cells and Generation of Polarized Epithelium
Author:
Date:
2018-06-05
[Abstract]  Airway basal stem cells are the progenitor cells within the airway that exhibit the capacity to self-renew and give rise to multiple types of differentiated airway epithelial cells. This stem cell-derived epithelium displays organized architecture with functional attributes of the airway mucosa. A protocol has been developed to culture and expand human airway basal stem cells while preserving their stem cell properties and capacity for subsequent mucociliary differentiation. This achievement presents a previously unrealized opportunity to maintain a durable supply of progenitor cells derived from healthy donors to differentiate into human primary airway epithelium for cellular and molecular-based studies. Further, basal stem cells can be harvested from patients with a specific airway ... [摘要]  气道基底干细胞是气道内的祖细胞,表现出自我更新的能力并产生多种类型的分化的气道上皮细胞。这种干细胞来源的上皮细胞显示出具有气道粘膜功能属性的有组织的结构。已经开发了一种方案来培养和扩展人气道基底干细胞,同时保持其干细胞特性和后续粘液分泌的能力。这项成就提供了一个以前未实现的机会,以保持源自健康供体的祖细胞的持久供应,以分化为用于基于细胞和分子的研究的人原发性气道上皮。此外,基底干细胞可以从患有特定气道疾病的患者(例如囊性纤维化)中收集,从而能够在适当的气道粘膜环境下研究疾病特异性细胞的潜在改变的行为。在这里,我们详细描述了一系列气道基底干细胞系列扩增的方案,以实现几乎无限制的气道基底细胞的生成,这些细胞可以储存并随时用于随后的培养和分化。此外,我们描述了气液基底干细胞在空气 - 液体界面处的可渗透Transwell过滤器上的培养和分化,以创建功能性粘膜睫毛伪分层极化气道上皮粘膜。

【背景】气道疾病建模和药物发现已经从在气液界面(ALI)的可渗透Transwell过滤器上生长的原代呼吸道上皮培养物的开发和使用中获益。与永生化细胞系相比,该模型具有几个优点,即原代上皮细胞可以分化成具有多种上皮细胞类型(包括纤毛,浆膜和基底细胞)的气道粘膜,并且它们的排列在体内是相当反映的蜂窝组织。主要的ALI模型表现出功能性微生理过程,包括跳动纤毛和分泌粘液的能力,这些特征在细胞系衍生的上皮单层中显着不存在。此外,原代细胞不依赖于人工永生化或转化,因为细胞系来源的上皮细胞确实存在,因此不受细胞系中可能发生的错误信号传导的阻碍,这可能会错误地表示气道上皮中发生的过程。尽管有这些显着的限制,永生化细胞系被广泛用于模拟和研究气道上皮细胞,因为原发性气道上皮细胞存在自己的一系列挑战。原代上皮细胞在传代数次后无法复制,必须连续收获并分离以完成每组研究。另外,改变或缺失感兴趣基因表达的分子生物学技术难以实现,并且与原代上皮细胞一起维持。这些缺点造成成本和技术障碍,阻碍了原发性ALI培养物的广泛使用,尽管它们在调查气道粘膜方面有明显优势。 ...

Primary Cultures from Human GH-secreting or Clinically Non-functioning Pituitary Adenomas
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  Pituitary adenomas are among the more frequent intracranial tumors usually treated with both surgical and pharmacological–based on somatostatin and dopamine agonists–approaches. Although mostly benign tumors, the occurrence of invasive behaviors is often detected resulting in poorer prognosis. The use of primary cultures from human pituitary adenomas represented a significant advancement in the knowledge of the mechanisms of their development and in the definition of the determinants of their pharmacological sensitivity. Moreover, recent studies identified also in pituitary adenomas putative tumor stem cells representing, according to the current hypothesis, the real cellular targets to eradicate most malignancies. In this protocol, we describe the procedure to establish primary cultures ... [摘要]  垂体腺瘤是更常见的颅内肿瘤之一,通常用基于生长抑素和多巴胺激动剂手术的手术和药物治疗。 虽然多为良性肿瘤,但侵入性行为的发生常常被检测到,导致预后较差。 来自人类垂体腺瘤的原代培养物的使用代表了对其发育机制的知识以及其药理敏感性决定因素的定义方面的显着进步。 此外,最近的研究也在垂体腺瘤中发现了假定的肿瘤干细胞,根据目前的假设,它代表了根除大多数恶性肿瘤的真实细胞靶标。 在这个协议中,我们描述了从人垂体腺瘤建立原代培养的程序,以及如何选择,体外扩增和表型鉴定推定的垂体腺瘤干细胞。

【背景】垂体腺瘤是最常见的颅内肿瘤之一(高达15%),横断面研究发现每100,000名居民中约有90例发病,其中绝大多数为30岁以上的成年人。大约10%的未经选择的垂体在尸检时进行了检查(即考虑到之前未诊断为垂体疾病的受试者的垂体)( ,Molitch,2017)。尽管通常为良性肿瘤,但垂体腺瘤的处理可因与激素分泌过多相关的临床综合征或发展以治疗抗性,高增殖率,快速复发和绒毛外侵袭为特征的侵袭行为而复杂化(Carreno等人,2017)。成年垂体干细胞的持续存在(Florio,2011)导致垂体腺瘤(以及可能的其他良性瘤形成)的发展可以源自具有干细胞特性(主要是自我更新和分化)的肿瘤细胞的亚群能力),正如已经建立的恶性固体和血液肿瘤一样。

最近的实验证据表明,癌症干细胞(CSC)范例也适用于人和小鼠垂体腺瘤(Donangelo等人,2014; ...

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