| Expression and Purification of Recombinant Skd3 (Human ClpB) Protein and Tobacco Etch Virus (TEV) Protease from Escherichia coli
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Author:
Date:
2020-12-05
[Abstract] Skd3 (encoded by human CLPB) is a mitochondrial AAA+ protein comprised of an N-terminal ankyrin-repeat domain and a C-terminal HCLR-clade nucleotide-binding domain. The function of Skd3 has long remained unknown due to challenges in purifying the protein to high quality and near homogeneity. Recently we described Skd3 as a human mitochondrial protein disaggregase that solubilizes proteins in the mitochondrial intermembrane space. This protocol overcomes the challenges associated with purifying Skd3 and allows for in depth in vitro study of Skd3 activity. Tobacco etch virus (TEV) protease is required in the purification of Skd3. Thus, we also describe how to purify high quality TEV protease for use in the purification of Skd3, other purification protocols, and in vitro assays requiring TEV ...
[摘要] [摘要] Skd3（由人类CLPB编码）是一种线粒体AAA +蛋白，由N末端锚蛋白重复域和C末端HCLR分支核苷酸结合域组成。由于在纯化蛋白质达到高质量和接近均质性方面的挑战，Skd3的功能长期未知。最近，我们描述Skd3作为人类线粒体蛋白disaggregase ，在线粒体膜间间隙增溶蛋白。该协议克服了与纯化Skd3相关的挑战，并允许对Skd3活性进行深入的体外研究。Skd3的纯化需要烟草蚀刻病毒（TEV）蛋白酶。因此，我们还描述了如何净化高质量TEV蛋白酶可用于纯化Skd3，其他纯化方案以及需要TEV蛋白酶的体外测定。
[背景] Skd3是一种线粒体AAA +蛋白，与多系统线粒体疾病VII型3-甲基谷氨酸酸尿症（MGCA7）有关（Capo-Chichi等人，2015； Kanabus等人，2015； Saunders等人，， 2015; Wortmann等人，2015 ; Kiykim等人，2016 ）。由于在体外研究Skd3的能力有限，因此对生物学功能和这些突变对Skd3活性的影响的研究仍难以捉摸（Cupo和Shorter，2020； ...
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| Heterologous Expression and Purification of SARS-CoV2 Nucleocapsid Protein
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] This protocol describes a step by step method for heterologous expression of SARS-CoV2 Nucleocapsid (N) protein in Escherichia coli. Moreover, this protocol includes steps to purify the N protein to high purity and homogeneity. Thus, purified protein can be used for ligand binding assays and other biochemical experiments.
[摘要] [摘要]该方案描述了一种逐步在大肠杆菌中异源表达SARS-CoV2核衣壳（N）蛋白的方法。此外，该方案包括纯化N蛋白以获得高纯度和均一性的步骤。因此，纯化后的蛋白质可用于配体结合分析和其他生化实验。
[] 自2019年底在中国武汉姆被发现以来，SARS-CoV2感染在世界各地肆虐（Wu等人，2020年）。为了跟踪早期感染的进程，在血清学检测中，核衣壳蛋白（N）与棘突蛋白（S）一起用于监测纽约地区早期感染的进程。N是病毒蛋白中最高表达的一种，因此是一个很好的靶点。为了便于这些分析，我们开发了一个纯化方案，并成功地用于这些研究。
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| Heterologous Expression and Purification of SARS-CoV2 Nucleocapsid Protein
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Author:
Date:
2020-08-05
[Abstract] This protocol describes a step by step method for heterologous expression of SARS-CoV2 Nucleocapsid (N) protein in Escherichia coli. Moreover, this protocol includes steps to purify the N protein to high purity and homogeneity. Thus, purified protein can be used for ligand binding assays and other biochemical experiments.
[摘要] [摘要]该方案描述了一种逐步在大肠杆菌中异源表达SARS-CoV2核衣壳（N）蛋白的方法。此外，该方案包括纯化N蛋白以获得高纯度和均一性的步骤。因此，纯化后的蛋白质可用于配体结合分析和其他生化实验。
[] 自2019年底在中国武汉姆被发现以来，SARS-CoV2感染在世界各地肆虐（Wu等人，2020年）。为了跟踪早期感染的进程，在血清学检测中，核衣壳蛋白（N）与棘突蛋白（S）一起用于监测纽约地区早期感染的进程。N是病毒蛋白中最高表达的一种，因此是一个很好的靶点。为了便于这些分析，我们开发了一个纯化方案，并成功地用于这些研究。
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