| An Imaging Flow Cytometry Method to Measure Citrullination of H4 Histone as a Read-out for Neutrophil Extracellular Traps Formation
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] The formation of neutrophil extracellular traps (NETs) is thought to play a critical role in infections and propagating sterile inflammation. Histone citrullination is an essential and early step in NETs formation, detectable prior to the formation of the hallmark extracellular DNA-scaffolded strands. In addition to the classical microscopy method, new technologies are being developed for studies of NETs and their detection, both for research and clinical purposes. Classical microscopy studies of NETs are subjective, low throughput and semi-quantitative, and limited in their ability to capture the early steps. We have developed this novel Imaging Flow Cytometry (IFC) method that specifically identifies and quantifies citrullination of histone H4 as a NETs marker and its relationship with ...
[摘要] [摘要]中性粒细胞胞外陷阱（NETs）的形成被认为在感染和传播无菌炎症中起关键作用。组蛋白瓜氨酸化是NETs形成中必不可少的早期步骤，可在形成标志性的细胞外DNA支架链之前检测到。除了经典的显微镜方法外，还在研究和临床目的开发用于NETs及其检测的新技术。NET的经典显微镜研究具有主观性，低通量和半定量性，并且捕获早期步骤的能力有限。我们开发了这种新颖的成像流式细胞仪 （IFC）方法，专门识别和量化组蛋白H4的瓜氨酸化作为NETs标记及其与核和细胞水平其他改变的关系。这些包括核解聚和超缩合，多分叶状核与1-叶核和细胞膜损伤。在形成特定的细胞外DNA支架链之前，可以在用NETs诱导剂进行不同的治疗期后对NETs标记物进行定量。由于这些高通量基于图像的细胞分析功能可以通过严格的统计来执行，因此该协议适用于实验和临床应用以及作为生物标志物的NETosis的临床评估。
[背景]活化的中性粒细胞迅速募集到感染和受伤的地方；它们有助于宿主抵抗病原体和炎症。大约在二十年前，首次观察到对病原体的反应是，一部分中性粒细胞会经历细胞凋亡或坏死以外的不同类型的细胞死亡。这涉及染色质的早期缩合，核区室和颗粒区室的共定位，最后将这种混合物释放到环境中。锚定核成分（例如组蛋白）或细胞成分的细胞外DNA支架链，其中一些具有很强的抗病原特性，例如弹性蛋白酶或髓过氧化物酶（MPO），被称为“嗜中性细胞外陷阱”或NETs，并具有有效的抗菌活性（Brinkmann等人，2004）。最近的证据表明，母语也非感染性疾病，包括癌症，系统性关联红斑狼疮，镰状细胞病，动脉粥样硬化和血栓形成（Jorch和Kubes，2017年）。尚不清楚NETs或其任何成分（无细胞DNA或组蛋白）是否作为驱动因素导致了这些疾病的病理，或者它们是否是免疫反应失衡的副产物。NETs在某些疾病中也可能充当生物标志物，并提供有关治疗方案功效的信息（Barnado等，2016）。NETs相关成分（例如弹性蛋白酶或MPO）存在于自身免疫性疾病患者的血浆中，也存在于感染中，这使这些分子作为生物标记物的特异性变得复杂。因此，迫切需要用于NETs表征的新方法，这些方法应在研究之间提供一致的标准，并且对于机械和临床应用均可靠。 ...
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| Murine Pancreatic Islets Transplantation under the Kidney Capsule
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Type 1 diabetes (T1D) is an autoimmune disease caused by the lack of insulin-producing pancreatic beta cells leading to systemic hyperglycemia. Pancreatic islet transplantation is a valid therapeutic approach to restore insulin loss and to promote adequate glycemic control. Pancreatic islet transplantation in mice is an optimal preclinical model to identify new therapeutic strategies aiming at preventing rejection and optimizing post-transplant immuno-suppressive/-tolerogenic therapies.
Islet transplantation in preclinical animal models can be performed in different sites such the kidney capsule, spleen, bone marrow and pancreas. This protocol describes murine islet transplantation under the kidney capsule. This is a widely accepted procedure for research purposes. Stress ...
[摘要] 1型糖尿病（T1D）是由于缺乏产生胰岛素的胰腺β细胞导致系统性高血糖症而引起的自身免疫性疾病。 胰岛移植是恢复胰岛素损失和促进充分血糖控制的有效治疗方法。 小鼠胰岛移植是一种最佳的临床前模型，用于鉴定旨在预防排斥和优化移植后免疫抑制/抗原治疗的新治疗策略。
临床前动物模型中的胰岛移植可以在不同部位进行，如肾囊，脾脏，骨髓和胰腺。 该协议描述了肾囊下的鼠胰岛移植。 这是一个被广泛接受的研究目的。 动物造成的压力很小，并导致可靠和可重复的结果。
【背景】迄今为止在小动物模型中报道了许多用于胰岛植入的备选位置，并且必须根据要使用的程序的技术优势和实验目的来选择理想的位点。 考虑到肾囊是一种血管外部位，并且它没有免疫保护，肾囊下的胰岛移植仍然是一种低死亡率的手术过程，导致几天内高血糖症逆转。 另外，肾囊下的移植允许组织学研究和胰岛功能的正式证明（Cantarelli和Piemonti，2011; Elisa Cantarelli等人，2013）。
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