| Induction of Natural Competence in Genetically-modified Lactococcus lactis
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Natural competence can be activated in Lactoccocus lactis subsp lactis and cremoris upon overexpression of ComX, a master regulator of bacterial competence. Herein, we demonstrate a method to activate bacterial competence by regulating the expression of the comX gene by using a nisin-inducible promoter in an L. lactis strain harboring either a chromosomal or plasmid-encoded copy of nisRK. Addition of moderate concentrations of the inducer nisin resulted in concomitant moderate levels of ComX, which led to an optimal transformation rate (1.0 x 10-6 transformants/total cell number/g plasmid DNA). Here, a detailed description of the optimized protocol for competence induction is presented.
[摘要] 在过度表达细菌能力的主要调节因子ComX后，天然能力可以在乳酸乳球菌亚种乳酸和 cremoris 中激活。 在本文中，我们展示了通过在 L中使用乳链菌肽诱导型启动子调节 comX 基因的表达来激活细菌能力的方法。 含有 nisRK 的染色体或质粒编码拷贝的lactis 菌株。 加入中等浓度的诱导剂乳链菌肽导致伴随的中等水平的ComX，其导致最佳转化率（1.0×10 2 sup / -6>转化子/总细胞数/ g质粒DNA）。 在此，提出了用于能力归纳的优化协议的详细描述。
【背景】自然能力是细菌通过专门的摄取机制获得外源DNA的过程，之后内化的DNA整合到其基因组中或作为质粒DNA维持。一些细菌在特定的环境触发因素如基因毒性应激或饥饿时进入能力状态（Seitz和Blokesch，2013; Blokesch，2016）。群体感应系统，如 comCDE 或 comRS ，控制着革兰氏阳性菌的自然能力的激活（Håvarstein et al。，1995; Pestova et al。，1996; Kleerebezem et al。，1997b; Fontaine et al。，2015）。更具体地说， comC 和 comS 编码信息素，而 comD 编码组氨酸激酶和 comE 和 comR 编码响应调节器（Håvarstein et al。，1995; ...
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| Fluorescein Transport Assay to Assess Bulk Flow of Molecules Through the Hypocotyl in Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] The bulk transport of molecules through plant tissues underpins growth and development. The stem acts as a conduit between the upper and low domains of the plant, facilitating transport of solutes and water from the roots to the shoot system, and sugar plus other elaborated metabolites towards the non-photosynthetic organs. In order to perform this function efficiently, the stem needs to be optimized for transport. This is achieved through the formation of vasculature that connects the whole plant but also through connectivity signatures that reduce path length distributions outside the vascular system. This protocol was devised to characterize how cell connectivity affects the bulk flow of molecules traversing the stem. This is achieved by exposing young seedlings to fluorescein, for ...
[摘要] 分子通过植物组织的大量运输支撑了生长和发育。茎部充当植物上部和低部位之间的导管，促进溶质和水从根部向茎部系统的运输，糖和其他精细代谢物向非光合器官转运。为了有效地执行此功能，杆需要针对运输进行优化。这通过形成连接整个植物的脉管系统来实现，但也通过连接特征来减少血管系统外的路径长度分布。该协议被设计为描述细胞连接如何影响穿过茎的分子的大量流动。这是通过将幼苗暴露于荧光素而实现的，其中假定没有特定的转运蛋白存在于A中。在给定的暴露时间后，使用共焦显微镜和定量3D图像分析评估该荧光化合物在胚胎干（下胚轴）的单个细胞中的相对浓度。
【背景】结构和功能之间的联系一直着迷于生物学家，从器官的设计空间（Eldredge，1989）到进化路径的趋同或分歧（Morris，2003）。在较小规模的情况下，细胞也以稳健且严格控制的方式组织，与组织执行的功能密切相关（Jackson等人，2017a）。构成特定组织的细胞物理相互作用的集合也可被视为网络，即细胞连接体。这种连接体在植物中特别有趣，因为共享细胞壁阻碍细胞运动，因此网络动力学仅取决于细胞死亡和复制。
我们假设组织结构和细胞连接体与生理特征和器官功能有关。这样，网络指标和定量网络分析可用于预测并获得生物系统的理解（Duran-Nebreda和Bassel，2017; Jackson等人，2017b）。 ...
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