Percoll

Company: Cytiva

Catalog#: 17-0891-01

Preparation and Purification of β-1,3-glucan-Linked Candida glabrata Cell Wall Proteases by Ion-Exchange Chromatography, Gel Filtration, and MDPF-Gelatin-Zymography Assay

Pirjo Pärnänen, Timo Sorsa, Taina Tervahartiala and Pirjo Nikula-Ijäs

Published online: 2024-03-20

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Differential Fractionation of Erythrocytes Infected by Plasmodium berghei

Author:

Bénédicte Gnangnon, Véronique Peucelle and Christine Pierrot,

Date:

2020-06-05

[Abstract] The study of host/pathogen interactions at the cellular level during Plasmodium intra-erythrocytic cycle requires differential extraction techniques aiming to analyze the different compartments of the infected cell. Various protocols have been proposed in the literature to study specific compartments and/or membranes in the infected erythrocyte. The task remains delicate despite the use of enzymes or detergents theoretically capable of degrading specific membranes inside the infected cell.

The remit of this protocol is to propose a method to isolate the erythrocyte cytosol and ghosts from the other compartments of the infected cell via a percoll gradient. Also, the lysis of the erythrocyte membrane is done using equinatoxin II, which has proven to be more effective at ... [摘要] [摘要 ] 疟原虫内红细胞周期中细胞水平上宿主/病原体相互作用的研究需要采用差异提取技术来分析感染细胞的不同区室，文献中提出了各种方案来研究特定的区室和/或尽管理论上使用酶或去污剂能够降解被感染细胞内部的特定膜，但这项工作仍然很棘手。

该方案的任务是提出一种通过percoll 梯度从感染细胞的其他区室中分离出红细胞胞浆和鬼影的方法，此外，使用equinatoxin II 裂解红细胞膜的方法已经被证明是更有效的方法。有效的在红细胞裂解不管细胞感染状态，相比常用链球菌溶血素。该虫空泡（PV）的含量收集皂素后，恢复细胞膜和寄生虫胞液蛋白通过的Triton X-100裂解，裂解液由此获得的前通过分析W¯¯ 西部时代印迹以评估各种提取steps.This协议的准确度允许主机室的从寄生虫隔间（PV和寄生虫）的分离，从而导致出口到主机宿主蛋白质的潜力的研究，以及寄生虫蛋白质细胞。

[背景] 本文所介绍的协议是，我们最初发表在一个协议的一个改进的科学报告.The 该协议的最初的目标是执行的表征P. 疟原虫由寄生虫出口到它的主机cell.This蛋白允许的免疫荧光测定法的证实，证实了蛋白质的输出-以及被布雷菲德菌素A 阻断-以及在被感染的红细胞中输出时相互作用蛋白的分析（Gnangnon et al。，2019）。

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Drosophila Model of Leishmania amazonensis Infection

Author:

Kendi Okuda and Neal Silverman,

Date:

2017-12-05

[Abstract] This protocol describes how to generate and harvest antibody-free L. amazonensis amastigotes, and how to infect adult Drosophila melanogaster with these parasites. This model recapitulates key aspects of the interactions between Leishmania amastigotes and animal phagocytes. [摘要] 该协议描述了如何产生和收获无抗体的L型。 amazonensis amastigotes，以及如何用这些寄生虫感染成年果蝇（Drosophila melanogaster）。这个模型概括了利什曼原虫和动物吞噬细胞之间相互作用的关键方面。

【背景】由利什曼原虫引起的利什曼病，根据宿主的寄生虫种类和免疫状态，影响皮肤，粘膜或内脏器官。尽管小鼠感染模型已经提供了我们对这种寄生虫感染的大部分了解，但它并不适合于大规模的探索性方法。在我们的实验室，我们利用果蝇黑腹果蝇的易处理和强大的遗传学来建立利什曼原虫感染的模型并进行小规模的筛选来鉴定涉及的宿主基因在这些寄生虫的吞噬中（Okuda等人，2016）。具体而言，使用UAS-GAL4表达系统（Brand和Perrimon，1993），可能与吞噬作用相关的一组基因被特异性敲低，监测突变体感染的苍蝇的存活和寄生物负荷以鉴定调节感染的因素。

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