| Transfection and Activation of CofActor, a Light and Stress Gated Optogenetic Tool, in Primary Hippocampal Neuron Cultures
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Author:
Date:
2021-04-20
[Abstract] Proteins involved in neurodegeneration can be coupled with optogenetic reagents to create rapid and sensitive reporters to provide insight into the biochemical processes that mediate the progression of neurodegenerative disorders, including Alzheimer’s Disease (AD). We have recently developed a novel optically-responsive tool (the ‘CofActor’ system) that couples cofilin and actin (key players in early stage cytoskeletal abnormalities associated with neurodegenerative disorders) with light-gated optogenetic proteins to provide spatial and temporal resolution of oxidative and energetic stress-dependent biochemical events. In contrast to currently available small-molecule based biosensors for monitoring changes in the redox environment of the cell, CofActor is a ...
[摘要] [摘要]参与神经变性蛋白质可具有耦合光遗传学试剂来创建快速且灵敏的记者到provid Ë洞察介导的神经变性疾病，包括进展的生化过程阿尔茨海默氏病（AD）。我们最近开发了一种新型光学-响应工具（“辅”系统）夫妇COF伊林和行动中使用（与神经退行性疾病相关的早期阶段，细胞骨架异常关键球员）光门控光遗传学 蛋白质提供时空分辨率的氧化和高能应激依赖的生化事件。与目前可用的基于小分子的生物传感器来监测细胞氧化还原环境的变化相比，CofActor是一种光激活的，遗传编码的氧化还原传感器，可以通过精确的空间和时间控制来激活。在这里，我们描述了从新生小鼠制备的解离海马神经元培养物中CofActor系统的表达和激活的协议。将培养物转染用大号ipofectamine上的第五天体外（DIV5），然后暴露于细胞应激诱导刺激，导致的肌动蛋白的形成丝切蛋白可使用活细胞成像技术可以观察到杆。本文所述的方案可用于研究暴露于神经退行性刺激（例如毒性Aβ42低聚物）的活神经元中与压力相关的细胞骨架失调。此外，从AD的转基因小鼠模型和/或与KO相关的小鼠KO小鼠分离的神经元中传感器的表达可以促进我们对与神经变性相关的早期细胞骨架功能障碍的分子基础的理解。
[背景]神经变性疾病的生化标志（神经原纤维，团块和缠结，提高活性氧物质（ROS） ...
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| Method for Prolonged Incubation of Brain Slices
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Slices of neuronal tissue maintain a high degree of topographical and functional properties of neurons and glia and therefore are extensively used for measurements of neuronal activity at the molecular, cellular and network levels. However, the lifespan of slice preparations is narrow, averaging of 6-8 hours. Moreover, the average viability of brain slices varies according to animal age and region of interest, leading to the high variability and low reproducibility of recorded data.
Previous techniques to increase the viability of brain slices focused on reducing cytotoxicity by chemical means, including alterations of the artificial cerebrospinal fluid (aCSF) composition to alleviate the direct damage of the slicing procedure or adding protective antioxidants to reduce ...
[摘要] [摘要 ] 神经元组织的切片保持了神经元和神经胶质的高度地形和功能特性，因此被广泛用于在分子，细胞和网络水平上测量神经元的活性。然而，切片制剂的寿命很窄，平均为6-8小时。而且，脑切片的平均生存力会根据动物的年龄和目标区域而变化，从而导致记录数据的高变异性和低再现性。
先前增加脑切片活力的技术集中于通过化学手段降低细胞毒性，包括改变人工脑脊液（aCSF ）成分以减轻切片过程的直接损害或添加保护性抗氧化剂以减少细胞退化。在该协议中，我们将体温过低与恢复室中aCSF 条件（pH，温度和细菌水平）的牢固控制结合使用，以显着延长切片的生存能力。
考虑到其用途的广度，提高切片的生存能力和寿命可以大大提高数据的可重复性，并减少神经生理学研究中使用的动物的成本，时间和数量。
[背景 ] 神经组织切片提供基本的神经科学研究独特的优势，因为它使神经网络活动的直接调查和药理化合物对中枢神经系统的影响。因此，迫切需要为实验目的以最高质量制备和维持切片的活力。神经元切片的生存能力取决于几个内在和外在因素（Buskila 等人，2014），根据切片过程可将其分为三个阶段：切片前（切片前），切片中（切片）和切片后切片）切片程序。在切片前降低切片活力的主要因素包括局部缺血和缺氧，这是由于消除了持续供血引起的（Buskila et ...
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| Induction of Photothrombotic Stroke in the Sensorimotor Cortex of Rats and Preparation of Tissue for Analysis of Stroke Volume and Topographical Cortical Localization of Ischemic Infarct
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] The photothrombotic model of stroke is commonly used in research as it allows the ischemic infarct to be targeted to specific regions of the cortex with high reproducibility and well-defined infarct borders. Unlike other models of stroke, photothrombosis allows the precise size and location of infarct to be tightly controlled with minimal surgical invasion. Photothrombosis is induced when a circulating photosensitive dye is irradiated in vivo, resulting in focal disruption of the endothelium, activation of platelets and occlusion of the microvasculature (Watson et al., 1985; Dietrich et al., 1987; Carmichael, 2005). The protocols here define how photothrombosis can be specifically targeted to the sensorimotor forelimb cortex of rat with high reproducibility. ...
[摘要] 中风的光血栓形成模型通常用于研究，因为它允许缺血性梗塞针对特定区域的皮层，具有高重现性和明确的梗塞边界。 与其他卒中模型不同，光血栓形成能够以最小的手术入侵严密控制梗死的精确大小和位置。 当在体内辐射循环的光敏染料时诱导光血栓形成，导致内皮的局灶性破坏，血小板的活化和微血管的闭塞（Watson等人，1985年 ; Dietrich等人，1987; Carmichael，2005）。 这里的方案定义了如何将光致血栓形成特异性地靶向大鼠的感觉运动前肢皮层并具有高重现性。 提供了大鼠皮质组织处理的详细方法以允许精确分析脑卒中体积和立体定向确定缺血性损伤的精确皮层区域。
【背景】中风的光血栓形成模型允许在皮层的特定区域中精确布置缺血性梗塞（Carmichael，2005; Underly and Shih，2017）。光血栓形成可用于封闭皮层中的特定动脉和动脉分支（Carmichael et al。，2005），pia的个别血管（Taylor和Shih，2013），并定义了皮质区域如桶（Dietrich等人，1987）和后肢躯体感觉皮层（Que等人，1999）。使用这种方法，在许多实验动物模型中已经产生了高度可重现的缺血性梗塞，包括啮齿动物（Watson等人，1985; Carmichael等人，2005）和非人类动物模型人灵长类动物（Ikeda et ...
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