| Ligand and Carbohydrate Engagement (LACE) Assay and Fluorescence Quantification on Murine Neural Tissue
|
|
Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] The interaction between cell surface heparan sulphate and diffusible ligands such as FGFs is of vital importance for downstream signaling, however, there are few techniques that can be used to investigate this binding event. The ligand and carbohydrate engagement (LACE) assay is a powerful tool which can be used to probe the molecular interaction between heparan sulphate and diffusible ligands and can detect changes in binding that may occur following genetic or pharmacological intervention. In this protocol we describe an FGF17:FGFR1 LACE assay performed on embryonic mouse brain tissue. We also describe the method we have used to quantify changes in fluorescent LACE signal in response to altered HS sulphation.
[摘要] [摘要]细胞表面硫酸乙酰肝素与可扩散配体（例如FGFs）之间的相互作用对于下游信号传导至关重要，但是，很少有技术可用于研究这种结合事件。配体和碳水化合物结合（LACE）分析是一种功能强大的工具，可用于探测硫酸乙酰肝素与可扩散配体之间的分子相互作用，并可检测在遗传或药理学干预后可能发生的结合变化。在此协议中，我们描述了在胚胎小鼠脑组织上进行的FGF17：FGFR1 LACE分析。我们还描述了我们用来量化荧光LACE信号响应HS硫酸盐改变的变化的方法。
[背景]硫酸乙酰肝素（HS）是一种细胞外基质和细胞表面糖胺聚糖分子，可通过硫酸化进行广泛修饰。HS与包括FGF，Wnt，BMP和Slits在内的多种具有重要发展意义的信号分子相互作用。例如，在FGF信号传导期间，HS充当共受体，促进FGF配体与细胞表面FGFR受体的结合。此形成HS：FGF：FGFR需要复杂的对FGF信号发生（阿伦等人，2001） 。已显示HS的差异硫酸化会影响FGF配体与其FGFR细胞表面受体的结合。在我们最近的论文中，我们使用了配体和碳水化合物结合（LACE）分析方法来检测HS和FGF蛋白之间的相互作用（Clegg et ...
|
|
|
| Headpost Surgery for in vivo Electrophysiological Recording in the Mouse Inferior Colliculus during Locomotion
|
|
Author:
Date:
2020-12-05
[Abstract] The inferior colliculus (IC) is a critical midbrain integration center for auditory and non-auditory information. Although much is known about the response properties of the IC neurons to auditory stimuli, how the IC neural circuits function during movement such as locomotion remains poorly understood. Mice offer a valuable model in this respect, but previous studies of the mouse IC were performed in anesthetized or restrained preparations, making it difficult to study the IC function during behavior. Here we describe a neural recording protocol for the mouse IC in which mice are head-fixed, but can run on a passive treadmill. Mice first receive a headpost surgery, and become habituated to head-fixing while being on a treadmill. Following a few days of habituation, neural recordings of ...
[摘要] [摘要]下丘脑（IC）是听觉和非听觉信息的关键中脑整合中心。尽管对IC神经元对听觉刺激的响应特性了解很多，但对IC神经回路在运动（例如运动）过程中的功能仍知之甚少。小鼠在这方面提供了有价值的模型，但是先前对小鼠IC的研究是在麻醉或约束的制剂中进行的，因此很难研究行为过程中的IC功能。在这里，我们描述了一种用于鼠标IC的神经记录协议，其中鼠标固定在头上，但可以在无源跑步机上运行。小鼠首先收到头条手术，并在跑步机上习惯于固定头部。适应几天后，进行IC神经元活动的神经记录。可以在不同的行为条件下比较神经活动，例如静止不动或在跑步机上跑步。我们描述了如何克服因位置和上覆骨骼而引起的用于清醒IC记录的柱头手术的挑战。该协议允许研究行为小鼠的IC功能，同时允许精确的刺激控制和类似于麻醉制剂的记录方法的使用。
[背景]下丘脑（IC）是一个关键的中脑听觉融合中心，几乎所有提升输入的项目都指向该中心（Winer and Schreiner，2005）。该IC还接收非听觉输入，包括那些从体感区域，提示的听觉和非听觉信息（多模态的集成Gruters一个第二格罗，2012）。由于可用的遗传工具广泛，小鼠为阐明IC功能的细胞和电路级原理提供了重要模型（Ono等人，2017; Goyer等人，2019; Chen和Song，2019; Hoyt等人，2019）。等人，2019； ...
|
|
|
| Organotypic Slice Culture of the Embryonic Mouse Brain
|
|
Author:
Date:
2020-07-05
[Abstract] Organotypic slice culture is a powerful technique for exploring the embryonic development of the mammalian brain. In this protocol we describe a basic slice culture technique we have used for two sets of experiments: axon guidance transplant assays and bead culture assays.
[摘要] [摘要]器官型切片培养是探索哺乳动物大脑胚胎发育的有力技术。在这个方案中，我们描述了一种基本的切片培养技术，我们已经用于两组实验：轴突引导移植实验和珠子培养实验。
[背景] 器官型切片培养是近年来广泛应用的一种技术，在神经发育领域已成为一种特别流行的技术。它的最大优点是可以在体外培养发育中的神经细胞，同时保持组织的体内结构。在该方案中，我们描述了我们在最近的论文（Clegg等人，2019）中用于两个实验的切片培养技术。首先，我们进行了轴突引导移植实验，将荧光标记的组织移植到非荧光宿主切片上，观察轴突的生长情况。这是先前用于研究胼胝体发育的一个改进版本，但可以很容易地用于检查其他轴突束，如丘脑皮质束（Niquille et al.，2009）。其次，我们进行了微珠培养实验，将浸有重组FGF蛋白的小球植入组织中，检测组织对FGF蛋白的分子和细胞反应。以这种方式使用浸过蛋白的小球提供了一种在特定位置聚焦输送重组蛋白的方法，与将所有组织均匀暴露于蛋白质的浴敷法不同。这模拟了体内的情况，即形态发生素（如FGF17）在特定的解剖位置表达，然后在组织中扩散。该技术可用于探索对多种不同重组蛋白或药物的反应。
|
|
|