| Isolation and Quantification of Extracellular DNA from Biofluids
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] Extracellular DNA is studied as a diagnostic biomarker, but also as a factor involved in the pathophysiology of several diseases due to its pro-inflammatory properties. Extracellular DNA can be extracted from plasma, urine, saliva or other biofluids using standard DNA isolation procedures and specialized commercial kits. Sample preparation for isolation is important, freezing and thawing may affect the amount of extracellular DNA extracted. Subsequent centrifugations remove cells and cell debris from the samples to obtain true extracellular DNA. Small volume of samples especially from animal experiments is often an issue and it affects the DNA yield. Very short fragments (˂ 100 bp) can be lost during isolation and are difficult to quantify using PCR. Fluorometric methods asses all stained ...
[摘要] [摘要 ] 研究细胞外DNA作为一种诊断性生物标志物，但由于其具有促炎性，也可以作为多种疾病的病理生理因素。可以使用标准DNA分离程序和专门的商业试剂盒从血浆，尿液，唾液或其他生物流体中提取细胞外DNA。样品制备对于分离非常重要，冷冻和解冻可能会影响提取的细胞外DNA的量。随后的离心去除样品中的细胞和细胞碎片，以获得真正的细胞外DNA。少量样品尤其是动物实验样品常常是一个问题，它会影响DNA产量。片段很短（˂ 100 bp）在分离过程中可能会丢失，并且难以使用PCR进行定量。荧光法评估所有染色的DNA片段。选择定量细胞外DNA的方法至关重要，并且至少两种方法的组合是理想的。程序的标准化或至少在研究论文中的报告对于比较结果至关重要。
[背景 ] 胞外DNA通常被称为无细胞DNA是所有DNA的一个术语发现特别是在诊断生物流体细胞外。血浆DNA最早是由Mandel和Metais （1948）发现的。后来人们对所谓的液体活检的研究激发了人们对细胞外DNA研究的兴趣，液体活检作为无创筛选和诊断的基于DNA的生物标志物的来源（Poon和Lo，2001）。相同的胞外DNA，然而，也参与炎性疾病，如败血症的病理生理学（Lauková 等人，2017） ，急性肾损伤（詹森等人，2017）和急性肝衰竭（Vokálová ...
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| Preparation and Characterization of Ginger Lipid-derived Nanoparticles for Colon-targeted siRNA Delivery
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Synthetic nanoparticle-based drug delivery system is widely known for its ability to increase the efficacy and specificity of loaded drugs, but it often suffers from relatively higher immunotoxicity and higher costs as compared to traditional drug formulations. Contrarily, plant-derived nanoparticles appear to be free from these limitations of synthetic nanoparticles; they are naturally occurring biocompatible vesicles that do not generate immunotoxicity and are easy to obtain. Additionally, lipids isolated from plant-derived nanoparticles have shown the capability of assembling themselves to spherical nano-sized liposomal particles. Herein, we employ lipids extracted from ginger-derived nanoparticles and load them with therapeutic siRNA (CD98-siRNA) to create CD98-siRNA/ginger-lipid ...
[摘要] [摘要 ]基于合成纳米颗粒的药物递送系统以其增加所载药物的功效和特异性的能力而广为人知，但是与传统药物制剂相比，它经常遭受相对较高的免疫毒性和较高的成本。相反，植物来源的纳米粒子似乎不受合成纳米粒子的这些限制；它们是天然存在的生物相容性囊泡，不会产生免疫毒性并且易于获得。另外，从植物来源的纳米颗粒分离的脂质已显示出将其自身组装成球形纳米尺寸脂质体颗粒的能力。在本文中，我们采用从生姜纳米颗粒中提取的脂质，并用治疗性siRNA（CD98-siRNA）加载脂质，以创建CD98-siRNA /生姜脂质纳米颗粒。CD98-siRNA /姜脂脂质纳米颗粒的表征显示它们呈球形，直径约为189.5 nm。纳米颗粒的表面ζ电势在-18.1至-18.4mV之间变化。此外，在最近的研究中，CD98-siRNA /姜脂纳米颗粒在右旋糖酐硫酸钠（DSS）诱发的结肠炎小鼠模型中显示出特定的结肠靶向能力和出色的抗炎功效。
[背景 ] 小干扰RNA（siRN As）是一种有前途的治疗剂，可以通过沉默异常上调的信使RNA（mRNA）来治疗各种疾病（Nikam and Gore ，2018）。尽管siRNA的有效性，安全有效地将siRNA递送至治疗靶标仍然是一项艰巨的任务（Tatiparti et al ...
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| Calcein Release Assay to Measure Membrane Permeabilization by Recombinant Alpha-Synuclein
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Lipid membranes are involved in regulating biochemical and biological processes and in modulating the selective permeability of cells, organelles, and vesicles. Membrane composition, charge, curvature, and fluidity all have concerted effects on cellular signaling and homeostasis. The ability to prepare artificial lipid assemblies that mimic biological membranes has enabled investigators to obtain considerable insight into biomolecule-membrane interactions. Lipid nanoscale assemblies can vary greatly in size and composition and can consist of a single lipid monolayer, a bilayer, or other more complex assemblies. This structural diversity makes liposomes suitable for a wide variety of biochemical and clinical applications. Here, we describe a calcein dye leakage assay that we have developed ...
[摘要] [摘要] 脂质膜参与调节生物化学和生物过程，并调节细胞，细胞器和囊泡的选择性通透性。膜的组成，电荷，曲率和流动性均对细胞信号传导和体内平衡具有协同作用。制备模拟生物膜的人工脂质组装体的能力使研究人员能够深入了解生物分子与膜之间的相互作用。脂质纳米级装配体的大小和组成可以有很大不同，并且可以由单个脂质单层，双层或其他更复杂的装配体组成。这种结构上的多样性使脂质体适用于多种生化和临床应用。在这里，我们描述了一种钙黄绿素染料泄漏测定法，该测定法已开发用于监测磷脂酰小泡被α-突触核蛋白（ αSyn）破坏，α-突触核蛋白是一种突触前蛋白，在帕金森氏病（PD）中起着重要作用。我们目前的数据显示的效果腺苷酰化的α Syn的上α 的Syn 介导囊泡破裂，例如，此法可用于研究基因突变或翻译后修饰的作用，对α 的Syn -membrane相互作用，以确定蛋白质结合合作伙伴或扰乱这些相互作用的化学实体，并以研究的渗透活动不同血脂的影响α Syn 或其他任何蛋白质。
背景技术脂质体是由于脂质头基团和脂肪酸侧链之间的亲水和疏水相互作用而形成的纳米级脂质组装体。这些生物膜模仿脂质双层组件是研究蛋白质生物分子的膜相互作用的有用工具，这是由于：（i ）调节脂质体直径的灵活性，从而调节膜曲率；（ii）控制脂质成分（Ahmed 等，2019；Siontorou ...
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