| Isolation and ex vivo Expansion of Human Limbal Epithelial Progenitor Cells
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] Limbal stem cell transplantation has been used successfully to treat patients with limbal stem cell deficiency all over the world. However, long term clinical results often proved less satisfactory due to the low quality of the graft or inadequate properties of transplanted cells. To enhance the ex vivo expansion of human limbal epithelial stem or progenitor cells (LEPC) by preserving stem cell phenotype and to improve subsequent transplantation efficiency, cell-matrix interactions ex vivo should mimic the condition in vivo. The laminin isoforms preferentially expressed in the limbal niche can be used as a culture matrix for epithelial tissue engineering. We recently published the expansion of LEPC on various laminin isoforms and observed that laminin alpha ...
[摘要] [摘要] 角膜缘干细胞移植已成功用于治疗角膜缘干细胞缺乏症的患者。但是，由于移植物质量低或移植细胞特性不足，长期临床结果常常不能令人满意。为了通过保留干细胞表型来增强人角膜缘上皮干细胞或祖细胞（LEPC）的体外扩增，并提高后续移植效率，离体细胞-基质相互作用应模拟体内条件。在角膜缘利基中优先表达的层粘连蛋白同工型可以用作上皮组织工程的培养基质。我们最近发表了LEPC在各种层粘连蛋白同工型上的扩增，并观察到与组织培养板和其他层粘连蛋白同工型相比，层粘连蛋白α5衍生的基质通过保留干/祖细胞表型，支持LEPC的有效扩增。在这里，我们描述了通过重组人层粘连蛋白-511 E8片段（LN-511E8）作为培养底物，通过胶原酶消化和LEPC的有效扩增从尸体角膜缘组织分离LEPC的优化方案。
[背景] 角膜上皮干/祖细胞（LEPC）负责角膜上皮的持续更新，位于高度专业化和复杂的环境中。它包括特定的细胞外基质组分和在支撑角膜缘细胞小生corneo -scleral缘（Schermer 等人，1986; Cotsarelis 。等人，1989; 奥多涅斯。等人，2012 ;梅。等人，2012）。这种干/祖细胞储库的损坏或损伤可导致角膜新生血管形成，慢性炎症和与角膜混浊和视力丧失相关的基质瘢痕形成（Kenyon和Tseng，1989； Sangwan 和Tseng ...
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| Real-time Analysis of Auxin Response, Cell Wall pH and Elongation in Arabidopsis thaliana Hypocotyls
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Author:
Date:
2018-01-05
[Abstract] The rapid auxin-triggered growth of the Arabidopsis hypocotyls involves the nuclear TIR1/AFB-Aux/IAA signaling and is accompanied by acidification of the apoplast and cell walls (Fendrych et al., 2016). Here, we describe in detail the method for analysis of the elongation and the TIR1/AFB-Aux/IAA-dependent auxin response in hypocotyl segments as well as the determination of relative values of the cell wall pH.
[摘要] 拟南芥下胚轴的快速生长素触发的生长涉及核TIR1 / AFB-Aux / IAA信号传导并伴随质外体和细胞壁的酸化（Fendrych 等，2016）。 在这里，我们详细描述了在下胚轴节段中的延伸和TIR1 / AFB-Aux / IAA依赖性生长素响应的分析方法以及细胞壁pH的相对值的确定。
【背景】植物激素生长素诱导拟南芥下胚轴的快速生长。 这个过程需要TIR1 / AFB-Aux / IAA生长素共同受体。 生长素促进TIR1 / AFB和Aux / IAA的结合，导致后者的泛素化和降解，并导致生长素应答基因的转录。 这个协议的重点是测量拟南芥下胚轴的生长，生长素信号和细胞壁酸化。 该协议是基于以前Schenck等人的工作，2010年，Takahashi等人，2012年，Fraas 等人，2014年 和Spartz 等。，2014; 但与已发表的工作不同，我们描述了能够测量下胚轴生长期间发生的更大范围过程的程序; 从肉眼可见的器官伸长，通过共焦显微镜监测的细胞壁pH到通过荧光素酶生物发光显现的实时核生长素信号传导。
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| GC/MS-based Analysis of Volatile Metabolic Profile Along in vitro Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells
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2017-12-05
[Abstract] Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) are a promising tool in cell-based therapies for degenerative diseases. A safe application of hiPSCs in vivo, requires the detection of the presence of residual undifferentiated pluripotent cells that can potentially cause the insurgence of teratomas. Several studies point out that metabolic products may provide an alternative method to identify the different steps of cells differentiation. In particular, the analysis of volatile organic compounds (VOCs) is gaining a growing interest in this context, thanks to its inherent noninvasiveness. Here, a protocol for VOCs analysis from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) is illustrated. It is based on Solid-Phase Microextraction (SPME) technique coupled with gas chromatography-mass ...
[摘要] 人诱导的多能干细胞（hiPSC）是用于退化性疾病的基于细胞的疗法中的有前景的工具。 hiPSCs在体内的安全应用需要检测残留未分化多能细胞的存在，这可能会导致畸胎瘤的爆发。几项研究指出，代谢产物可能提供了另一种方法来确定细胞分化的不同步骤。特别是挥发性有机化合物（VOCs）的分析由于其固有的非侵入性而在这方面越来越受到关注。在这里，说明了从人诱导的多能干细胞（hiPSC）分析VOC的方案。它基于固相微萃取（SPME）技术与气相色谱 - 质谱联用（GC / MS）。该方法用于测量从绒毛膜样品（CVS）到hiPSC的细胞重编程期间和沿着hiPSC体外分化成早期神经祖细胞（NP）的细胞顶空中的挥发性代谢物修饰，穿过胚状体机构（EBs）的形成。
【背景】提出细胞代谢作为在分化的各个步骤期间研究干细胞的替代物。事实上，假设干细胞从多能性向完全分化的转变可能引起代谢产物的剧烈变化是合理的。在诱导的多能干细胞，亲本成纤维细胞和胚胎干细胞之间观察到了这种假设的第一个证据（Meissen等人，2012）。
在代谢产物中，挥发性有机化合物（VOC）吸引了人们对其收集的简单性，内在的非侵入性和广泛的分析方法的广泛关注（Boots et。，2015 ...
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