| Generation of the Compression-induced Dedifferentiated Adipocytes (CiDAs) Using Hypertonic Medium
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Current methods to obtain mesenchymal stem cells (MSCs) involve sampling, culturing, and expanding of primary MSCs from adipose, bone marrow, and umbilical cord tissues. However, the drawbacks are the limited numbers of total cells in MSC pools, and their decaying stemness during in vitro expansion. As an alternative resource, recent ceiling culture methods allow the generation of dedifferentiated fat cells (DFATs) from mature adipocytes. Nevertheless, this process of spontaneous dedifferentiation of mature adipocytes is laborious and time-consuming. This paper describes a modified protocol for in vitro dedifferentiation of adipocytes by employing an additional physical stimulation, which takes advantage of augmenting the stemness-related Wnt/β-catenin signaling. Specifically, this ...
[摘要] [摘要]目前的方法，以获得间充质干细胞（MSC）包括采样，培养，和扩大主要由脂肪，骨髓，和脐带组织的MSCs。然而，缺点是在总细胞在MSC池，和它们的衰减干性的数量有限在维生素- [R Ò扩张。作为替代资源，最近的天花板培养方法允许从成熟的脂肪细胞中生成去分化的脂肪细胞（DFAT）。然而，这种成熟脂肪细胞自发去分化的过程既费力又费时。本文描述了一种用于经修改协议在体外通过采用附加的物理刺激，其中脂肪细胞去分化TA KES扩充所述干性相关的优点的Wnt /β-catenin信号。具体来说，该协议利用含聚乙二醇（PEG）的高渗介质引入细胞外物理刺激以获得更高的效率，并引入更简单的脂肪细胞去分化程序。
[背景]脂肪组织由于其丰度大且侵袭性相对较低，因此是间充质干细胞（MSC）最具吸引力的来源之一（Shen等，2011 ；González-Cruz等，2012； Konno等人，2013）。脂肪来源的MSC，即从皮下脂肪组织的基质血管级分中分离，已被证实同时显示多谱系潜能的体外和体内（Anghileri等人，2008;冈萨雷斯。等人，2009;冈萨雷斯-雷伊等等人，2010； Jumabay等人，2010； Mao等人，2017和2019 ；Darnell等人，2018 ...
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| Generation of Human Mesenchymal Stem Cell 3D Spheroids Using Low-binding Plates
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] The 3D culture of human mesenchymal stem cells (hMSCs) represents a more physiological environment than classical 2D culture and has been used to enhance the MSC secretome or extend cell survival after transplantation. Here we describe a simple and affordable method to generate 3D spheroids of hMSCs by seeding them at high density in a low-binding 96-well plate.
Spheroids of hMSCs cultured in low-binding 96-well plates can be used to study the basic biology of the cells and to generate conditioned media or spheroids to be used in transplantation therapeutic approaches. These MSCs or their secretome can be used as a regenerative therapy and for tissue repair across multiple disease areas, including neurodegeneration.
In comparison to other methods (hanging drop, use ...
[摘要] 人间充质干细胞（hMSC）的3D培养代表比经典2D培养更生理的环境，并且已经用于增强MSC分泌组或移植后延长细胞存活。 在这里，我们描述了一种简单且经济实惠的方法，通过在低密度96孔板中高密度接种hMSC来生成三维球状体。
在低结合96孔板中培养的hMSC的球状体可用于研究细胞的基本生物学并产生用于移植治疗方法的条件培养基或球状体。 这些MSC或其分泌蛋白组可用作再生疗法和用于多个疾病区域的组织修复，包括神经变性。
与其他方法（悬滴，使用凝胶或生物材料，磁悬浮，等）相比，此处描述的方法简单且经济实惠，无需使用专用设备，昂贵材料或复杂试剂。
【背景】 间充质干细胞（MSCs）是开发针对中风或肌萎缩侧索硬化等疾病的新型再生疗法的有吸引力的候选者（Chen et al。，2001; Bang et al。，2005; Boido et al。，2014）。它们的多功能性使得技术的优化和标准化对于确保MSC疗法可以提供尽可能多的益处是必不可少的。使MSC的治疗潜力（例如，增强的抗炎介质分泌）最大化的一种可能方式是以3D方式培养它们（Bartosh ...
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| CRISPR/Cas Gene Editing of a Large DNA Virus: African Swine Fever Virus
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Gene editing of large DNA viruses, such as African swine fever virus (ASFV), has traditionally relied on homologous recombination of a donor plasmid consisting of a reporter cassette with surrounding homologous viral DNA. However, this homologous recombination resulting in the desired modified virus is a rare event. We recently reported the use of CRISPR/Cas9 to edit ASFV. The use of CRISPR/Cas9 to modify the African swine fever virus genome resulted in a fast and relatively easy way to introduce genetic changes. To accomplish this goal we first infect primary swine macrophages with a field isolate, ASFV-G, and transfect with the CRISPR/Cas9 donor plasmid along with a plasmid that will express a specific gRNA that targets our gene to be deleted. By inserting a reporter cassette, we are ...
[摘要] 大型DNA病毒（例如非洲猪瘟病毒（ASFV））的基因编辑传统上依赖于由报道盒组成的供体质粒与周围同源病毒DNA的同源重组。然而，这种导致所需修饰病毒的同源重组是罕见的事件。我们最近报道了使用CRISPR / Cas9编辑ASFV。使用CRISPR / Cas9修饰非洲猪瘟病毒基因组导致了引入遗传变化的快速且相对简单的方法。为了实现这一目标，我们首先用田间分离株ASFV-G感染原代猪巨噬细胞，并用CRISPR / Cas9供体质粒转染质粒，该质粒将表达靶向我们基因的特异性gRNA被删除。通过插入报告盒，我们能够通过有限稀释和噬菌斑纯化从亲本中纯化我们的重组病毒。我们以前曾报道将传统的同源重组方法与CRISPR / Cas9进行比较，结果导致重组增加超过4个对数。
【背景】 非洲猪瘟（ASF）是一种由ASF病毒（ASFV）引起的高度致命的猪传染性病毒性疾病。 ASFV的基因组由大约180-190千碱基对的双链DNA基因组组成。 ASFV引起一系列疾病，从高度致命到亚临床，取决于宿主特征和病毒株（Tulman et al。，2009）。 ASFV没有商业疫苗;实验上，2007年格鲁吉亚爆发的唯一能够抵御目前流行病毒株的疫苗（ASFV-G）是含有一个或多个病毒基因组缺失的减毒活疫苗，例如:( O'Donnell et ...
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