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Date:
2018-05-05
[Abstract] The unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii is an important model organism for studying photosynthesis, acclimation to abiotic stress, cilia biology, and many other biological processes. Many molecular biology tools exist for interrogating gene function including the ability to easily transform the nuclear genome of Chlamydomonas. While technical advances such as TALENs, ZFNs and CRISPR are making it easier to precisely edit the nuclear genome, the efficiency of such methods in Chlamydomonas is at present very low. In contrast, random insertion by nuclear transformation tends to be a much more efficient process. This protocol describes a method for transformation of the Chlamydomonas nuclear genome by electroporation. The protocol requires at ...
[摘要] 单细胞绿藻莱茵衣藻是研究光合作用，适应非生物胁迫，纤毛生物学和许多其他生物过程的重要模式生物。 许多分子生物学工具用于询问基因功能，包括轻松转化衣藻的核基因组的能力。 虽然TALENs，ZFNs和CRISPR等技术进步正在使精确编辑核基因组变得更加容易，但此类方法在衣原体中的效率目前非常低。 相反，通过核转变随机插入往往是一个更有效的过程。 该协议描述了通过电穿孔转化衣原体核基因组的方法。 该协议需要至少3天的工作，并通常导致1-2周内出现小菌落。
【背景】众多的分子，遗传和基因组资源使得莱茵衣藻（以下简称衣衣属）成为研究各种生物过程的优秀模式生物。已经开发了许多技术来改变衣藻核，叶绿体和线粒体，包括粒子轰击（Boynton等，1988），玻璃珠转化（Kindle，1990）和电穿孔（Shimogawara等人，1998）。核衣壳菌可通过将衣藻暴露于物理或化学诱变剂（例如紫外线或甲磺酸乙酯）而产生，但通常通过随机插入诱变转基因DNA而获得。由于衣藻核转化的同源重组效率非常低（Zorin等人，2009; Jinkerson和Jonikas，2015），转化的DNA通常整合到核基因组随机位点。存在许多用于随后鉴定异位DNA的插入位点的技术，包括经典遗传作图（Rymarquis等人，2005），TAIL-PCR（Dent等人 ...
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