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Corning 100 mL molecular biology grade water

Company: Corning
Catalog#: 46-000-CI
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Ectopic Gene Expression in Macrophages Using in vitro Transcribed mRNA
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  Macrophages are immune cells that contribute to host defense through various mechanisms including phagocytosis and antigen presentation. Their antimicrobial capacity is subverted by clinically important intracellular pathogens such as Mycobacterium tuberculosis. The study of host-pathogen interactions using these cells is therefore of considerable interest. Such studies often seek to express tagged proteins to characterize their activities, localizations, and protein-protein interactions. Here, we describe a robust method for transient protein expression in macrophages using mRNA lipoplex transfections. [摘要]  巨噬细胞是通过包括吞噬作用和抗原呈递在内的多种机制促成宿主防御的免疫细胞。 它们的抗菌能力被临床上重要的细胞内病原体诸如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)所破坏。 因此使用这些细胞进行宿主 - 病原体相互作用的研究具有相当大的意义。 这样的研究通常试图表达标记的蛋白质来表征它们的活性,定位和蛋白质 - 蛋白质相互作用。 在这里,我们描述了使用mRNA脂质复合物转染在巨噬细胞中瞬时蛋白质表达的稳健方法。

【背景】典型的实现蛋白质表达的方法,包括使用阳离子聚合物转染DNA,核转染和病毒转导(Zhang等人,2009)在巨噬细胞中特别困难,因为这些细胞具有对 各种危险信号如胞质DNA。 因此,用于外源基因递送的常规方法导致差的转染效率和细胞死亡。 我们推论,正如最近的报道(Van De Parre等人,2004; McLenachan等人,2004)所述,转染mRNA而不是DNA,将是实现巨噬细胞中蛋白质表达的更好的替代方案 。,2013)。 我们能够实现高转染效率而不损失巨噬细胞活力(Koster等人,2017)。 我们的方法不需要昂贵的设备,可以适应表达外源性和内源性蛋白质。

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